Сдать декларацию ип через сайт ифнс: Представление декларации в электронной форме | ФНС России

Содержание

Налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения (КНД 1152017) / КонсультантПлюс

Налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения (КНД 1152017)

Применяется — с отчетности за 2021 год

Утверждена — Приказом ФНС России от 25.12.2020 N ЕД-7-3/958@

Срок сдачи:

— по общему правилу — организации — не позднее 31 марта года, следующего за истекшим налоговым периодом, индивидуальные предприниматели — не позднее 30 апреля года, следующего за истекшим налоговым периодом;

— при прекращении предпринимательской деятельности, в отношении которой применялась упрощенная система налогообложения — не позднее 25-го числа месяца, следующего за месяцем, в котором согласно уведомлению, представленному в налоговый орган в соответствии с пунктом 8 статьи 346.13 НК РФ, указанная деятельность прекращена;

— при утрате права на применение упрощенной системы налогообложения — не позднее 25-го числа месяца, следующего за кварталом, в котором на основании пункта 4 статьи 346.

13 НК РФ налогоплательщик утратил право применять упрощенную систему налогообложения

Скачать форму налоговой декларации по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения:

— в TIF (данный TIF-шаблон рекомендован ФНС России и размещен на сайте АО «ГНИВЦ» www.gnivc.ru)

— в PDF (данная машиночитаемая форма подготовлена на основании TIF-шаблона АО «ГНИВЦ» и доступна для заполнения в программе Adobe Reader (программа размещена на сайте www.adobe.com))

Образец заполнения налоговой декларации по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения >>>

Материалы по заполнению налоговой декларации по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения:

— Приказ ФНС России от 25.12.2020 N ЕД-7-3/958@

— Письмо ФНС России от 24.11.2021 N СД-4-3/16342@

— Готовое решение: Как организации заполнить декларацию по УСН

— Готовое решение: Как ИП заполнить декларацию по УСН за 2021 г. и последующие периоды

— Готовое решение: Как заполнить и сдать декларацию по УСН при ликвидации организации и закрытии ИП

— Готовое решение: Как заполнить и сдать декларацию по УСН при ликвидации автономного учреждения

— Готовое решение: Как заполнить декларацию по УСН, если получен убыток

— Готовое решение: Как заполнить декларацию по УСН при смене адреса

— Готовое решение: Как заполнить декларацию по УСН при отсутствии доходов

— Готовое решение: Уточненная декларация по УСН

— Готовое решение: Нулевая декларация по УСН

— «Годовой отчет — 2021» (под ред. В.И. Мещерякова) («Агентство бухгалтерской информации», 2021)

— «Годовой отчет. Упрощенная система налогообложения — 2021» (под общ. ред. д. э. н. Ю.А. Васильева) («БиТуБи», 2021)

— Статья: Декларация по УСНО — 2021 (Новикова С.Г.) («Упрощенная система налогообложения: бухгалтерский учет и налогообложение», 2021, N 10)

— Статья: Декларирование бюджетным и автономным учреждением полученных доходов (Новикова С. ) («Ревизии и проверки финансово-хозяйственной деятельности государственных (муниципальных) учреждений», 2021, N 10)

— Статья: С 2021 года — новая декларация на УСНО (Сухов А.Б.) («Бухгалтер Крыма», 2021, N 3)

— Статья: Новая форма декларации по УСНО (Кораблева Н.) («Автономные учреждения: бухгалтерский учет и налогообложение», 2021, N 4)

Архивные формы

налоговой декларации по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения:

— налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения, применявшаяся с отчетности за 2016 год до отчетности за 2021 год

— налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения, применявшаяся с отчетности за 2014 год до отчетности за 2016 год

— налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения, применявшаяся с отчетности за 2011 год до отчетности за 2014 год

— налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения, применявшаяся с отчетности за 2009 год до отчетности за 2011 год

— налоговая декларация по налогу, уплачиваемому в связи с применением упрощенной системы налогообложения, применявшаяся с отчетности за I квартал 2007 года до отчетности за 2009 год

—————————————-

Сдача налоговой отчётности в ФНС

Организации и индивидуальные предприниматели должны сдавать налоговую отчётность в ИФНС.

Причём большинство из них обязаны делать это в электронном виде. Это возможно как через сайт Федеральной налоговой службы, так и с использованием сервисов операторов электронного документооборота.

Налоговая отчётность – это документы, которые содержат сведения об исчислении и уплате налогов физлицами, ИП и организациями. Она включает в себя налоговую декларацию и налоговый расчёт авансового платежа. Отметим, что для каждого налога – отдельная форма декларации.

В связи со сложной для экономики ситуацией в стране, связанной с пандемией коронавируса, сроки сдачи некоторой отчётности перенесли. Например, срок сдачи декларации по ЕНВД за 1-й квартал 2020 года был перенесён на три месяца. Теперь отправить эту отчётность можно до 20 июля.

И это не единственное послабление от государственного регулятора, связанное с коронавирусом. За переносами сроков следует внимательно следить – в разделе Базы знаний компании Такском. Также можно уточнить в самой налоговой по отчётности и её срокам сдачи в мае-июне 2020 года.

Кто сдаёт отчётность в ИФНС в электронном виде

В текущем, 2020 году, все плательщики налога на добавленную стоимость (НДС) должны сдать отчётность в налоговую через интернет. Отправлять в электронном виде декларации и расчёты авансовых платежей обязаны также предприятия с численностью сотрудников 100 и более человек – вне зависимости от применяемого режима (ОСНО/УСН/ЕНВД).

Что касается отчётности по налогу на доходы физических лиц (НДФЛ), то отправка отчётности через интернет сулит тем организациям, в которых трудоустроены 25 и более человек. В 2020 году предстоит сдача двух отчётов – 2-НДФЛ (ежегодно) и 6-НДФЛ (ежеквартально).

Кто должен сдавать декларации электронно: подробный перечень

Итак, в 2020 году сдачу отчётности через интернет в виде деклараций в обязательном порядке осуществляют:
— все плательщики НДС, в том числе налоговые агенты;
— налогоплательщики, у которых среднесписочная численность сотрудников за предшествующий календарный год свыше 100 человек;
— вновь созданные (в том числе при реорганизации) организации, у которых численность сотрудников свыше 100 человек;
— крупнейшие налогоплательщики – вне зависимости от среднесписочной численности сотрудников.

Список крупнейших налогоплательщиков формируется не разово: ИФНС ежегодно обновляет его исходя из определенных критериев (Приказ МНС России от 16.04.2004 № САЭ-3-30/290@).

Кто должен сдать новую отчётность по страховым взносам

В 2020 году отправка такой отчётности, как единый расчёт по страховым взносам, закреплена в обязательном порядке за:
— плательщиками страховых взносов, у которых среднесписочная численность сотрудников, в пользу которых производятся выплаты и другие вознаграждения, за предшествующий расчётный период свыше 25 человек;
— вновь созданными организациями, у которых численность вышеуказанных сотрудников также свыше 25 человек.

Эти категории организаций и ИП должны отчитаться в налоговый орган по форме КНД 1151111.

Как сдать отчётность через сайт налоговой

Сайт инспекции налоговой содержит сервис, используя который налогоплательщики в рамках пилотного проекта могут отправлять налоговую и бухгалтерскую отчётность.

В отправке отчётности через сайт ФНС нет ничего сложного, однако есть свои подводные камни. Так, пускай и сдать налоговую отчётность там можно бесплатно, сделать это всё равно невозможно, если у вас нет электронной подписи. Её нужно будет приобрести дополнительно в Удостоверяющем центре. С этой точки зрения, вероятно, выгоднее сразу приобрести сервис оператора ЭДО – например, компании Такском. Во все тарифы для электронной отчётности включена электронная подпись и КриптоПро для работы с ней.

Кроме того, чтобы отправить налоговую отчётность через сайт ИФНС, все данные предстоит ввести вручную, на что уйдёт немало времени. А в системе оператора ЭДО многие данные по вашему предприятию подгрузятся автоматически.

Однако помимо отчётности через сайт ФНС, есть и другие способы, чтобы сдать электронно отчёт. Так, на IT-рынке существуют сервисы операторов ЭДО, с помощью которых без проблем можно осуществить отправку налоговой отчётности через интернет.

Сдача отчётности через интернет: решение компании Такском

Отправить отчётность в налоговую и не только можно через сервис компании Такском Онлайн-Спринтер. Что он собой представляет?

Это онлайн-кабинет, для доступа в который нужен лишь персональный компьютер, стабильно работающий интернет и электронная подпись. Вход осуществляется по логину и паролю, быстро и легко. Дополнительного ПО устанавливать не требуется.

В абсолютно все тарифные планы компании для отчётности через интернет входит безлимитная отправка документов во все подразделения ИФНС. Однако отчётность в налоговую – не единственный вид отчётности, которую обязаны сдавать налогоплательщики. Также можно выбрать более расширенный тариф или дополнительно подключить обмен и с другими контролирующими органами: ФСС, Росстатом, РПН, Центробанком.

Что ещё входит в тарифы

В сервис встроен календарь бухгалтера: он персональный для каждого конкретного пользователя. Календарь напомнит о приближающихся сроках сдачи по каждому виду отчёта.

Текстовые подсказки по заполнению форм отчётов сократят время и силы бухгалтера, а автоматическая система проверки на ошибки не даст отправить некорректно заполненный документ.

Реализована сверка с бюджетом: во всех тарифах Такском предоставляет справки о состоянии расчетов с ИФНС и ПФР, акты сверки, выписки операций, перечень отправленной отчётности и другие документы.

Электронный документооборот с контрагентами Такском также внедрил в свой софт. Это неограниченное количество входящих документов и выгодный пакет на исходящие. Обмен УПД и счетами-фактурами за несколько кликов.

Сверка по НДС – ещё одно из преимуществ ПО компании Такском. Пользователь сможет сверить книги покупок и продаж, журналы учёта счетов-фактур, сформировать ответы на автотребования ФНС.

В сервисе есть и оценка вероятности проверки: по 12 критериям сопоставляется финансово-хозяйственная деятельность организации с рисками.

Сдача кадровой отчётности также имеется в функционале ПО Такскома. В Онлайн-Спринтере есть и возможность подключить дополнительное рабочее место – для сотрудника отдела кадров. В сервисе уже реализована работа с электронными больничными и новыми формами отчётов по электронным трудовым книжкам СЗВ-ТД и СЗВ-М.

Акции компании

Такском предлагает новым клиентам сдать отчёт в налоговую через интернет бесплатно в ходе акции «Тест-драйв». Это отличная возможность познакомиться с Онлайн-Спринтером в пробный период.

Компания предлагает 30 дней бесплатной отправки отчётности через интернет во все подразделения госорганов и свободного тестирования сервисов. Отправить заявку на тест-драйв можно по ссылке.

Также компания предлагает скидки для группы компаний – при подключении двух и более организаций. Размер скидки зависит от числа организаций на абонентском обслуживании.

Сдача налоговой отчётности через интернет: тенденция времени

В заключении отметим, что за последние несколько лет наблюдается устойчивый тренд на перевод документооборота с госорганами в электронный вид. Причём это касается не только компаний, которые по закону уже обязаны отправить отчётность в электронной форме, но и тех, кто пока может делать это на добровольной основе.

Ведь сдать отчётность в налоговую через интернет гораздо удобнее, чем путём личного визита в НО или отправкой по почте России. Сдавая свою отчётность электронно, вы избегаете изнуряющих очередей при личных посещениях инспекции, исключаете спорные ситуации с госорганом о сроках отправки отчётов по почте.

У сдачи отчётности через интернет есть плюсы и для контролирующих органов. Они экономят время на обработку бумажных отчётов от налогоплательщиков и быстрее приводят всё к единым форматам.

О других возможностях электронной отчётности, последних законодательных изменениях и новых акциях компании читайте в специальном разделе Базы знаний компании Такском.

Отправить

Запинить

Твитнуть

Минфин ужесточает правила подачи налоговых деклараций

Налоговая декларация будет признаваться неподанной, если ее подаст человек, не уполномоченный представлять организацию. Такая новация содержится в новом законопроекте о внесении изменений в ст. 80 и 88 ч. I Налогового кодекса (НК) РФ. Основаниями для непринятия налоговой декларации также могут оказаться недостоверные сведения об организации или ее отсутствие в ЕГРЮЛе, исключение компании или ИП из реестра. В случае выявления хотя бы одного из указанных признаков в налоговой отчетности она будет считаться неподанной. Это может усложнить работу компаний, считают юристы.

Сейчас ФНС может принять или отказать в приеме при подаче декларации не в ту налоговую; без подписи ответственного лица; без документов, удостоверяющих личность ответственного физического лица. При этом перечень оснований для отказа может отличаться для деклараций в электронном и бумажном виде, говорится в приказе ФНС от 08.07.2019 № ММВ-7-19/343.

В законе эти основания не перечислены, обращают внимание юристы. «На практике отказы в приеме деклараций по основаниям, предусмотренным в проекте закона, существовали и ранее, однако их перечень был урегулирован только на уровне ведомственных актов ФНС, – поясняет партнер налоговой практики CMS Russia Гайк Сафарян. – При этом в НК РФ прямо закреплено, что налоговый орган не вправе отказать в принятии налоговой декларации, если она предоставлена налогоплательщиком в установленной для этого форме».

Уже сейчас налоговая может не принять декларацию по причинам, перечисленным в законопроекте. «Например, ИФНС может отказать в приеме декларации, если она подписана лицом, у которого отсутствуют полномочия подтверждать достоверность и полноту указанных сведений», – отмечает партнер юридической компании «Генезис» Василий Сосновский. Однако чаще всего налоговики идут навстречу налогоплательщику и принимают декларации даже с изъянами, а исправить недочеты сейчас можно без риска каких-либо санкций, указывает юрист.

Законопроект Минфина направлен на борьбу с подачей притворных деклараций. «Минфин четко хочет определить в НК шесть оснований, при наличии которых налоговая инспекция сможет отказать в приеме деклараций», – поясняет Сосновский. Хотя от новых правил могут пострадать и добросовестные налогоплательщики. «На практике иногда случаются ситуации, когда работающие организации не могут сдать декларацию по НДС из-за необоснованного отказа ФНС, – приводит пример руководитель департамента бухгалтерского учета аудиторско-консалтинговой группы «Градиент Альфа» Анна Шаталова. – Такая декларация сдается исключительно в электронном формате. Если ее не принимают, организации грозит не только штраф за несвоевременную сдачу декларации, но и приостановление операций по банковским счетам (из-за несдачи декларации в течение 10 дней). Также возникнут проблемы у контрагентов-покупателей, которые не смогут подтвердить вычеты по НДС, пока не будет принята электронная декларация у организации-поставщика». При новых требованиях риск возникновения таких ситуаций может возрасти.

При этом юристы обращают внимание, что предложенный перечень оснований лишь усложнит деятельность добросовестных организаций и почти не повлияет на мошеннические. «Предложенный перечень оснований недостаточный для того, чтобы выявлять новых недобросовестных налогоплательщиков, – замечает Сосновский. – Владельцы фирм-однодневок смогут его обойти, например, с помощью использования электронной цифровой подписи, оформленной на номинальных директоров».

Сдача налоговой отчетности через интернет — как сдать отчетность в налоговую в электронном виде

Поначалу все кажется сложным, но после прочтения нашей статьи все станет понятно

Когда необходима сдача налоговой отчетности

Налоговая отчетность давно стала привычным делом для многих. Не важно, кто вы — физическое лицо, ИП или организация: инспекторы проследят за тем, чтобы вы сдали документы в срок.

А вот в какой именно срок – зависит от сведений, которые вы хотите передать в налоговую. Все даты указаны на сайте ФНС, поэтому вы легко сориентируетесь.

Совет от банка:
Сроки обязательно нужно соблюдать. Они носят вовсе не рекомендательный характер. В противном случае инспекторы налагают штрафы и даже могут привлечь к административной ответственности.

Если вы еще ни разу не сталкивались с необходимостью подачи отчетности в ФНС, то давайте разберемся, что же это такое и в каких случаях ее нужно подавать.

Налоговая отчетность — это набор документов, которые нужно предоставить в налоговую службу после какого-то определенного события или по истечении определенного периода.

Например, если ИП прекратил свою работу, или вы получили прибыль с продажи недвижимости.

Основная цель – это учет начисленных и уплаченных налогов.

Выделяют 2 вида отчетности:

Декларация о налогах

Расчет авансового платежа

По сути, вы рассказываете о всех своих доходах, об их источниках и расходах. Сюда же относится информация о налоговых льготах и объектах налогообложения. На основании этой информации рассчитывается налог. Декларацию подают по НДС, по налогу на имущество и на прибыль.

Содержит практически ту же самую информацию за отчетный период, что и налоговая декларация. Из этих данных рассчитывается налог, который будет выплачен авансом.

Точность — главное правило при подаче налогового отчета

Если вы не знаете, как правильно заполнить декларацию, обратитесь к более опытным друзьям или знакомым. Лично я так и сделала. Мне помогли грамотно оформить документ, который без проблем приняли в ФНС.

Вы работаете на себя и хотите развить собственное дело? Для таких целей можно оформить кредит для самозанятых. Вы получите деньги на развитие бизнеса быстро и без лишних формальностей. Переходите по ссылке и узнайте, сколько вам одобрят прямо сейчас.

Сдача в электронной форме

Подать отчетность онлайн даже впервые не так сложно. Введение электронных форм подачи отчетности значительно упростило трудоемкий процесс заполнения документов.

Даже если вы привыкли лично присутствовать в отделении ФНС, рассмотрите несколько преимуществ данного способа.

Экономия времени.

Отпрашиваться с работы, менять свои планы на день, ехать в неудобно расположенный офис налоговой — и все это ради того, чтобы подать документы. Теперь об этом можно забыть. Заполните форму в любое удобное время и не тратьте силы на ожидание в очереди.

Не нужно заполнять бланки в двух вариантах.

Да, в электронных формах не нужно ничего дублировать, и это тоже ускоряет процесс.

Расскажите своим близким об электронной форме. Это сэкономит им время

Отсутствие ошибок.

Моим самым большим страхом было совершить какую-нибудь ошибку в формировании документа – его бы просто не приняли. Но в электронном бланке ошибки сведены к минимуму: программа даст знать, если что-то не так.

Подтверждение доставки документа.

Информация об изменении статуса отчета обновляется в течение суток. Больше не нужно отправлять дополнительные запросы.

Вы в любой момент можете просмотреть все документы, которые подавали в налоговую, если вдруг понадобился срочный доступ.

Защита персональных данных.

Никто посторонний не сможет заполучить и исправить документы, ведь они доступны только вам и работнику ФНС.

Совет от банка:
Для автоматизации налоговой отчетности некоторые документы принимаются только в электронном виде, а некоторые – письменно. Узнайте об этом заранее, если не найдете нужных бланков онлайн.

Личное посещение инспекции

С введением электронных бланков личные посещения никто не отменял. Заполнить форму в интернете или прийти самому – решайте сами. Все зависит от наличия у вас времени и желания.

Я отправилась в отделение инспекции и была приятно удивлена. Не нужно с утра пораньше приходить и занимать очередь – поход можно спланировать именно в тот день и время, когда вам удобно.

Совет от банка:
На сайте ФНС можно выбрать день и время записи. После заполнения небольшой информации о себе вам на почту придет талон с датой и временем посещения. Не забудьте взять его с собой и затем отсканировать в терминале. Если вы опоздаете на 10 минут и более, то талон будет недействителен. Поэтому приходите вовремя.

Так как я решила отправиться в отдел налоговой самостоятельно, то заранее скачала с сайта актуальные на тот момент документы.

В зависимости от вида налоговой отчетности найдите нужный бланк и заполните заранее дома в спокойной обстановке. Это также сэкономит время.

Однако поступать именно так вовсе не обязательно. Если у вас есть какие-то вопросы, то вы можете получить бланки в отделении и заполнить их с помощью специалиста.

Если вы руководитель организации, то можете прийти в инспекцию как лично, так и отправить вместо себя бухгалтера или даже уполномоченного представителя.

Документы можно заполнить дома, это избавит от ожиданий вас и специалиста

Представление отчетности почтой

Альтернативный способ отправки отчетности. Перед отправкой обязательно приложите опись документов, которые пересылаете. Так специалист сразу увидит, если что-то было утеряно.

Датой подачи считается дата отправки, которая отражена в почтовом штемпеле. Для подобных пересылок налоговая служба дает 6 дней.

Главный минус такого способа – почта не предоставляет отчетности о том, приняла ли ФНС ваши документы. Это значит, если что-то пошло не так, вы не сможете отреагировать оперативно.

Совет от банка:
Если вы попытаетесь отправить почтой документы, которые подают только в электронном виде, сотрудник налоговой откажет в их принятии. Так вы рискуете просрочить время подачи.

Можно ли сдать отчетность через представителя

Если вы — представитель организации, то выбирайте любой удобный способ: визит в инспекцию лично, отправка документов в электронном виде или почтой.

Единственное условие – у вас должна быть доверенность. Формат доверенности, электронный или бумажный, зависит от того, какой вариант подачи вы выбрали.

Налоговая отчетность в реальности не так уж и сложна, как кажется. Конечно, у новичков в этом деле возникают затруднения, и я тоже испытала это на себе. Но благодаря помощи опытных друзей и специалистов налоговой службы вы без труда с этим справитесь.

Заполнить НД по УСН | СБИС Помощь

Заполнить НД по УСН

Организации и индивидуальные предприниматели, находящиеся на упрощенной системе налогообложения, обязаны сдавать в налоговую инспекцию декларацию по УСН.

Срок сдачи

Отчет сдается ежегодно:

организациями — не позднее 31 марта;
ИП — не позднее 30 апреля.

Как сформировать

В разделе «Отчетность/Налоговая» или «Учет/Отчетность/Налоговая» (в зависимости от конфигурации) создайте отчет «НД по УСН».
На титульном листе проверьте, правильно ли указана налоговая инспекция и реквизиты организации.
Добавьте разделы и заполните показатели. Это можно сделать так же, как в любом другом отчете, но мы рекомендуем воспользоваться мастером:
1. Нажмите «Заполнить упрощенно».
2. Выберите объект налогообложения и укажите ставку.
3. Нажмите , заполните страховые взносы и выплаты.
4. Укажите местонахождение (код ОКТМО) и ставку налога. Если они менялись в течение года, установите флаг «Адрес менялся в течение года» или «Менялась в течение года».
5. Заполните данные о доходах и расходах нарастающим итогом.
  Если организация платит торговый сбор, установите флаг «Являюсь плательщиком торгового сбора» и заполните доходы от этой деятельности.
  Чтобы заполнить «Целевое использование имущества в рамках благотворительной деятельности», разверните блок, нажмите «+Поступление» и укажите данные.
6. Нажмите «Заполнить» — указанные данные будут внесены в поля декларации.

Как заполнить

Подробнее о формулах расчета и содержании каждого раздела читайте здесь.

Как отправить

Проверьте и отправьте отчет. Он считается принятым, когда инспекция пришлет извещение о вводе.

В разделе «ФНС» создайте отчет «НД по УСН».
На титульном листе проверьте, правильно ли указана налоговая инспекция и реквизиты организации.
Добавьте разделы и заполните показатели.

Как заполнить

Подробнее о формулах расчета и содержании каждого раздела читайте здесь.

Также вы можете посмотреть встроенную справку по заполнению.

Как отправить

Проверьте и отправьте отчет. Он считается принятым, когда инспекция пришлет извещение о вводе.

Нашли неточность? Выделите текст с ошибкой и нажмите ctrl + enter.

Как записаться на приём для представления налоговой декларации 3-НДФЛ

Федеральная налоговая служба предоставляет налогоплательщикам возможность записаться на прием в налоговую инспекцию в режиме онлайн. Сервис доступен на сайте ФНС России www.nalog.ru

Сервис «Онлайн-запись на прием в инспекцию» позволяет заранее спланировать визит в налоговую инспекцию и свести к минимуму время ожидания в очереди.

Данный сервис дает возможность записаться физическим, юридическим лицам и индивидуальным предпринимателям по следующим вопросам:

предоставление налоговой и бухгалтерской отчетности
проведение сверки расчетов с бюджетом
постановка/снятие с учета лиц
присвоение ИНН
прием и выдача документов
прием писем, заявлений
информирование

Чтобы записаться на прием в ИФНС России по г. Иваново для сдачи налоговой декларации 3-НДФЛ, необходимо:

кликнуть по ссылке «Онлайн – запись на прием в инспекцию» на главной странице сайта;
ознакомиться с условиями предоставления услуги и подтвердить согласие;
выбрать тип налогоплательщика (юридическое лицо, индивидуальный предприниматель или физическое лицо). Обязательными для заполнения являются поля, отмеченные красной звездочкой;
выбрать → ИФНС России по г. Иваново → ТОРМ и наименование услуги из перечня → налоговая и бухгалтерская отчетность, НДФЛ;
с помощью календаря выбрать дату приема, а затем время приема;
проверить правильность информации, ввести символы, указанные на картинке, и подтвердить запись на обслуживание в инспекции.

Системой будет сформирован талон на обслуживание в инспекции с указанием окна (кабинета) для приема налогоплательщика.

Необходимо распечатать талон и сохранить PIN-код при обращении в Инспекцию.

В день приема в здании инспекции по адресу: ул. Красной Армии, 3/5, 1-й этаж, зал №3 нужно ввести PIN-код в терминале электронной очереди в зеленом поле → «По предварительной онлайн записи».

Как ИП сдать декларацию о доходах в 2021 году.

Сроки подачи декларации для ИП

Какие отчеты и в какие сроки ИП подает в зависимости от используемой системы налогообложения

Перечень форм отчетности для индивидуальных предпринимателей зависит от применяемой системы налогообложения. ИП на общем режиме (ОСНО) сдают декларацию по НДС раз в квартал. Этот отчет подается только в электронной форме и только через специализированного оператора связи (абз.1 п. 5 ст. 174 НК РФ). Перед тем как сдавать декларацию в налоговую для ИП в электронном виде, следует заключить договор с оператором электронного документооборота и изготовить ключ электронной подписи. Отчет, представленный на бумаге, признается несданным.

Кроме того, ИП на ОСНО сдают годовой отчет по форме 3-НДФЛ.

Возможные варианты подачи:

в бумажном виде;
через личный кабинет на сайте ФНС;
через оператора ЭДО;
заказать налоговую декларацию ИП у организации, специализирующейся на составлении и сдаче бухгалтерской и налоговой отчетности.

Если ИП применяет УСН, то отчитываться следует раз в год. Инструкция, как сдать декларацию по УСН для ИП через личный кабинет налогоплательщика:

Установить программу «Налогоплательщик ЮЛ».
Изготовить квалифицированную электронную подпись. Для этого обратитесь в удостоверяющий центр, занимающийся изготовлением таких подписей.
Обратиться в ФНС с паспортом для получения доступа к личному кабинету.
В программе «Налогоплательщик ЮЛ» предусмотрено автоматическое заполнение декларации ИП после ввода всех данных: реквизиты, объект налогообложения, суммы доходов и расходов.
Если вы используете один из бесплатных сервисов, предлагающих заполнить декларацию ИП на УСН онлайн, проверьте актуальность формы. Бланк для 2021 года утвержден приказом ФНС №ЕД-7-3/[email protected] от 25.12.2020, который опубликован 21.01.2021 и вступает в силу через 2 месяца после опубликования.

За несвоевременное представление отчетности по УСН предусмотрены санкции.

При отсутствии деятельности в отчетном периоде сдается единая упрощенная декларация. Этот отчет принимается как в бумажном, так и в электронном виде.

Сроки сдачи налоговых деклараций ИП приведены в таблице:

Какие есть способы подготовить отчет

От руки

Если вы заполняете бланк от руки, используйте шариковую ручку с чернилами синего или черного цвета. Исправления не допускаются. Проверьте наличие штрихкода на бланке.

Поля документа заполняются слева направо. В текстовых полях допускается использование только заглавных букв. В свободных ячейках поставьте прочерки.

Онлайн

Есть возможность сдать декларацию ИП через сайт ИФНС. Этот способ более надежный, чем заполнение вручную, т. к. на сайте всегда актуальная информация и есть возможность проверки контрольных соотношений. Кроме того, сервис заполнит все поля автоматически — вручную прочерки проставлять не придется.

С помощью специальных сервисов

В сервисах по отправке отчетности предусмотрено автоматическое заполнение форм. Здесь тоже не придется переживать по поводу того, что бланк окажется устаревшим: информация обновляется своевременно. Так, в сервисе «Контур.Экстерн» следует зайти во вкладку «ФНС», выбрать пункт меню «Отчеты» и «Создать новый». Если у вас имеется готовый файл отчета, сформированный в бухгалтерской программе, воспользуйтесь пунктом «Загрузить из файла».

Как проверить декларацию

Если вы сдаете отчет через сайт налоговой или оператора ЭДО, контрольные соотношения проверяются автоматически. Главное — не допустить ошибок при указании сумм, формирующих налогооблагаемую базу. Так, при выборе объекта налогообложения «Доходы минус расходы» иногда возникают ошибки при отнесении тех или иных выплат к расходам, уменьшающим базу по единому налогу. Подробный перечень таких расходов приведен в п. 1 ст. 346.16 НК РФ.

При определении налоговой базы по НДФЛ (для ИП на ОСНО) учитываются все поступления денежных средств в кассу и на расчетный счет за проданные товары или оказанные услуги. Кроме того, 3-НДФЛ учитывает все виды доходов физического лица: полученные от предпринимательской деятельности и не связанные с ней, например доходы от продажи личного имущества.

Способы отправки документа

ИП вправе представить отчетность (за исключением декларации по НДС) одним из способов, перечисленных ниже.

Лично

Отчет сдается в налоговый орган по месту регистрации ИП. При себе необходимо иметь паспорт и второй экземпляр отчета, на котором сотрудник ФНС ставит отметку о принятии.

По почте

Если вы отправляете отчетность по почте, составляйте опись вложения и обязательно сохраните экземпляр описи со штампом почтового отделения. Дата отправки признается датой сдачи отчетности.

Через сайт

Одним из самых доступных способов отправить декларацию ИП онлайн в налоговую является сервис ФНС. Доступ к сервису бесплатный. Потребуется квалифицированная электронная подпись.

Через оператора ЭДО

Если у вас заключен договор с одним из операторов ЭДО, вы, вероятно, знаете, как подать декларацию ИП в налоговую через интернет в 2021 году. Подготовьте файл в бухгалтерской программе, если вы ведете бухучет самостоятельно, и выгрузите его в программу отправки отчетности. Квитанция о приеме приходит в течение 1-2 дней. Кроме того, есть возможность сформировать отчет непосредственно через сервис оператора. Система проверит контрольные соотношения, после чего документ следует подписать и отправить. При необходимости распечатайте сформированный отчет.

Добро пожаловать в OSFPmsa — версия 3.0 Спецификация IP-декларация

От кого: Крис Коул

Отправлено: Суббота, 14 марта 2020 г., 10:23

Кому: [email protected]

Копия: Андреас Бехтольсхайм ; Кристоф Метивье ; Брайан Кирк ; Брайан Парк ; Уоррен Меггитт com>; Цзяшу Чен

Тема: OSFP Rev. 3.0 Публикация спецификаций + Напоминание о декларации IP

Уважаемые члены OSFP MSA,

У нас есть результаты голосования за публикацию спецификаций Rev. 3.0, для которых повезло с продленным сроком Пятница, 13 марта 2020 г.

Всего полученных голосов	9
В пользу публикации	9
Возражение против публикации	0
Воздержаться	0

Следовательно, ред. 3.0 Спецификация будет опубликована Редакцией на следующей неделе.

***** ВАЖНОЕ НАПОМИНАНИЕ *****

Мы получили только одну декларацию ИС. Учитывая размер специального коннектора OSFP MSA SMT, это кажется небольшим числом.

В документе OSFP MSA указано:

Раскрытие информации об интеллектуальной собственности: Ни один участник не обязан проводить какой-либо патентный поиск
. Каждый Участник должен добросовестно сообщить в письменной форме до
о любом голосовании за принятие Проекта Спецификации в качестве Спецификации всем представителям или контактам
Участников в ТАБЛИЦЕ УЧАСТНИКОВ MSA о существовании и
идентификации любого из патенты его или его Аффилированных лиц, о которых действительно известно
представителю Участника и которые, если базовая технология включена в Спецификацию
, могут обоснованно содержать Существенные пункты формулы изобретения.

Мы будем принимать декларации ИС до пятницы, 20 марта 2020 г. В этот момент мы опубликуем все полученные на веб-сайте OSFP. Затем мы предоставим участникам одну неделю на то, чтобы активно изменить свой голос за публикацию Rev.3.0. В том маловероятном случае, если разрешение на публикацию будет отменено, мы удалим версию 3.0 с веб-сайта и решим проблемы Участников.

IFN-λ1 с цитокинами оси Th27 и IFN-α определяют различные подмножества при системной красной волчанке (СКВ) | Исследования и терапия артрита

Gustafsson JT, Simard JF, Gunnarsson I, Elvin K, Lundberg IE, Hansson LO, et al. Факторы риска сердечно-сосудистой смертности у больных системной красной волчанкой, проспективное когортное исследование. Артрит Res Ther. 2012;14:R46. дои: 10.1186/ar3759.

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

Vikerfors A, Johansson AB, Gustafsson JT, Jönsen A, Leonard D, Zickert A, et al. Клинические проявления и антифосфолипидные антитела у 712 пациентов с системной красной волчанкой: оценка двух диагностических тестов. Ревматология (Оксфорд). 2013;52:501–9. doi:10.1093/ревматология/kes252.

КАС Статья Google Scholar

Кварнстрем М., Дзикайте-Оттоссон В., Оттоссон Л., Густафссон Дж.Т., Гуннарссон И., Свенунгссон Э. и другие. Аутоантитела к функционально активному RING-домену Ro52/SSA ассоциированы с активностью заболевания у больных волчанкой. волчанка. 2013; 22: 477–85. дои: 10.1177/0961203313479420.

Артикул пабмед Google Scholar

Рённблом Л.Е., Альм Г.В., Оберг К.Е. Аутоиммунитет после терапии альфа-интерфероном злокачественных карциноидных опухолей. Энн Интерн Мед. 1991; 115: 178–83.

Артикул пабмед Google Scholar

Munroe ME, Lu R, Zhao YD, Fife DA, Robertson JM, Guthridge JM, et al. Измененный интерферон II типа предшествует накоплению аутоантител, а повышенная активность интерферона I типа предшествует классификации системной красной волчанки. Энн Реум Дис.2016;75:2014–21. doi: 10.1136/annrheumdis-2015-208140.

Артикул пабмед Google Scholar

Rönnblom L, Eloranta ML. Сигнатура интерферона при аутоиммунных заболеваниях. Курр Опин Ревматол. 2013; 25: 248–53. doi: 10.1097/BOR.0b013e32835c7e32.

Артикул пабмед Google Scholar

Киру К.А., Ли К., Джордж С., Лука К., Петерсон М.Г.Е., Кроу М.К. Активация пути интерферона-α идентифицирует подгруппу пациентов с системной красной волчанкой с отчетливыми серологическими признаками и активным заболеванием.Ревмирующий артрит. 2005; 52:1491–503. дои: 10.1002/арт.21031.

КАС Статья пабмед Google Scholar

Бенгтссон А.А., Стурфельт Г., Трюдссон Л., Бломберг Дж., Алм Г., Валлин Х. и др. Активация системы интерферона I типа при системной красной волчанке коррелирует с активностью заболевания, но не с антиретровирусными антителами. волчанка. 2000; 9: 664–71.

КАС Статья пабмед Google Scholar

Киру К.А., Ли С., Джордж С., Лука К., Папагианнис И.Г., Петерсон М.Г.Э. и др. Координация гиперэкспрессии генов, индуцированных интерфероном-α, при системной красной волчанке. Ревмирующий артрит. 2004; 50:3958–67. дои: 10.1002/арт.20798.

КАС Статья пабмед Google Scholar

10.

Русинова И., Форстер С., Ю. С., Каннан А., Массе М., Камминг Х. и др. Interferome v2.0: обновленная база данных аннотированных генов, регулируемых интерфероном.Нуклеиновые Кислоты Res. 2013;41:D1040–6. дои: 10.1093/нар/gks1215.

КАС Статья пабмед Google Scholar

11.

Wu Q, Yang Q, Lourenco E, Sun H, Zhang Y. Интерферон-λ1 индуцирует секрецию хемокинов, происходящих из мононуклеарных клеток периферической крови, у пациентов с системной красной волчанкой: его корреляция с активностью заболевания. Артрит Res Ther. 2011;13:R88. дои: 10.1186/ar3363.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

12.

Blazek K, Eames HL, Weiss M, Byrne AJ, Perocheau D, Pease JE, et al. IFN-λ устраняет воспаление путем подавления нейтрофильной инфильтрации и продукции IL-1β. J Эксперт Мед. 2015; 212:845–53. doi: 10.1084/jem.20140995.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

13.

Sheppard P, Kindsvogel W, Xu W, Henderson K, Schlutsmeyer S, Whitmore TE, et al. IL-28, IL-29 и их цитокиновый рецептор класса II IL-28R.Нат Иммунол. 2003; 4: 63–8. дои: 10.1038/ni873.

КАС Статья пабмед Google Scholar

14.

Инь З., Дай Дж., Дэн Дж., Шейх Ф., Наталья М., Ши Т. и др. ИФН III типа продуцируются плазмоцитоидными дендритными клетками человека и стимулируют их. Дж Иммунол. 2012;189:2735–45. doi:10.4049/jиммунол.1102038.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

15.

Волк К., Витте К., Витте Э., Рафтери М., Коколакис Г., Филипп С. и др. IL-29 продуцируется клетками T _H 17 и опосредует кожную противовирусную активность при псориазе. Sci Transl Med. 2013;5:204ra129. doi:10.1126/scitranslmed.3006245.

Артикул пабмед Google Scholar

16.

Zahn S, Rehkämper C, Kümmerer BM, Ferring-Schmidt S, Bieber T, Tüting T, et al. Доказательства патофизиологической роли интерферона типа III, полученного из кератиноцитов (IFNλ), при кожной красной волчанке.Джей Инвест Дерматол. 2011; 131:133–40. дои: 10.1038 / jid.2010.244.

КАС Статья пабмед Google Scholar

17.

Mordstein M, Neugebauer E, Ditt V, Jessen B, Rieger T, Falcone V, et al. Лямбда-интерферон придает клеткам эпителия респираторного и желудочно-кишечного тракта резистентность к вирусным инфекциям. Дж Вирол. 2010;84:5670–7. doi:10.1128/ОВИ.00272-10.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

18.

Zickert A, Amoudruz P, Sundström Y, Rönnelid J, Malmström V, Gunnarsson I. IL-17 и IL-23 при волчаночном нефрите – связь с гистопатологией и ответ на лечение. БМС Иммунол. 2015;16:7. doi: 10.1186/s12865-015-0070-7.

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

19.

Роуз Т., Грюцкау А., Хирзеланд Х., Хушер Д., Дэнрих С., Дзионек А. и др. IFNα и его ответные белки, IP-10 и SIGLEC-1, являются биомаркерами активности заболевания при системной красной волчанке.Энн Реум Дис. 2013;72:1639–45. doi: 10.1136/annrheumdis-2012-201586.

КАС Статья пабмед Google Scholar

20.

Bauer JW, Petri M, Batliwalla FM, Koeuth T, Wilson J, Slattery C, et al. Интерферон-регулируемые хемокины как биомаркеры активности системной красной волчанки: проверочное исследование. Ревмирующий артрит. 2009;60:3098–107. дои: 10.1002/арт.24803.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

21.

Merrill JT, Furie R, Werth VP, Khamashta M, Drappa J, Wang L, et al. Анифролумаб снижает активность заболевания во многих доменах органов при умеренной и тяжелой системной красной волчанке (СКВ) [резюме THU0295]. Энн Реум Дис. 2016; 75 Дополнение 2:293. doi:10.1136/annrheumdis-2016-eular.4033.

Артикул Google Scholar

22.

Tan EM, Cohen AS, Fries JF, Masi AT, McShane DJ, Rothfield NF, et al. Пересмотренные критерии 1982 года для классификации системной красной волчанки.Ревмирующий артрит. 1982; 25: 1271–7.

КАС Статья пабмед Google Scholar

23.

Castrejón I, Tani C, Jolly M, Huang A, Mosca M. Показатели для оценки пациентов с системной красной волчанкой в клинических испытаниях, долгосрочных обсервационных исследованиях и клинической помощи. Клин Эксперт Ревматол. 2014;32(5 Приложение 85):S85–95.

Google Scholar

24.

Лян М.Х., Сочер С.А., Робертс В.Н., Эсдейл Дж.М.Измерение активности системной красной волчанки в клинических исследованиях. Ревмирующий артрит. 1988; 31: 817–25.

КАС Статья пабмед Google Scholar

25.

Bombardier C, Gladman DD, Urowitz MB, Caron D, Chang CH, Комитет по исследованиям прогнозов при СКВ. Вывод SLEDAI: индекс активности заболевания у больных волчанкой. Ревмирующий артрит. 1992; 35: 630–40.

КАС Статья пабмед Google Scholar

26.

Уровиц М.Б., Гладман Д.Д. Показатели активности заболевания и повреждения при СКВ. Baillieres Clin Rheumatol. 1998; 12:405–13.

КАС Статья пабмед Google Scholar

27.

Странд В., Гладман Д., Изенберг Д., Петри М., Смолен Дж., Тагвелл П. Критерии исхода для использования в клинических испытаниях системной красной волчанки. J Ревматол. 1999; 26: 490–7.

КАС пабмед Google Scholar

28.

Klahr S. Модификация диеты при исследовании почечной недостаточности. N Engl J Med. 1989; 320: 864–6. дои: 10.1056/NEJM198

3201310.

КАС Статья пабмед Google Scholar

29.

Столл Т., Зайферт Б., Изенберг Д.А. SLICC/ACR Damage Index является валидным, а баллы почечных и легочных органов являются предикторами тяжелого исхода у пациентов с системной красной волчанкой. Br J Ревматол. 1996; 35: 248–54.

КАС Статья пабмед Google Scholar

30.

Gustafsson JT, Gunnarsson I, Källberg H, Pettersson S, Zickert A, Vikerfors A, et al. Курение сигарет, антифосфолипидные антитела и сосудистые явления при системной красной волчанке. Энн Реум Дис. 2015;74:1537–43. doi: 10.1136/annrheumdis-2013-205159.

Артикул пабмед Google Scholar

31.

Миякис С., Локшин М.Д., Ацуми Т., Бранч Д.В., Брей Р.Л., Сервера Р. и др. Заявление о международном консенсусе по обновлению критериев классификации определенного антифосфолипидного синдрома (АФС).Джей Тромб Хемост. 2006; 4: 295–306. doi:10.1111/j.1538-7836.2006.01753.x.

КАС Статья пабмед Google Scholar

32.

Yin Z, Huang J, He W, Cao Z, Luo X, Zhang C, et al. Уровень восьми цитокинов в сыворотке у пациентов ханьского происхождения с системной красной волчанкой с использованием метода мультиплексных флуоресцентных микросфер. Cent Eur J Immunol. 2014; 39: 228–35. дои: 10.5114/ceji.2014.43728.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

33.

Мэнсон Дж.Дж., Ма А., Роджерс П., Мейсон Л.Дж., Берден Дж.Х., ван дер Влаг Дж. и др. Взаимосвязь между анти-дцДНК, антинуклеосомными и анти-альфа-актининовыми антителами и маркерами почечной недостаточности у пациентов с волчаночным нефритом: проспективное продольное исследование. Артрит Res Ther. 2009;11:R154. дои: 10.1186/ar2831.

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

34.

Bizzaro N, Villalta D, Giavarina D, Tozzoli R. Являются ли антинуклеосомные антитела лучшим диагностическим маркером системной красной волчанки, чем антитела к двухцепочечной ДНК? Систематический обзор и исследование метаанализа.Аутоиммунная ред. 2012; 12:97–106. doi:10.1016/j.autrev.2012.07.002.

КАС Статья пабмед Google Scholar

35.

Кога Т., Ичиносе К., Цокос Г.К. Т-клетки и IL-17 при волчаночном нефрите. Клин Иммунол. doi: 10.1016/j.clim.2016.04.010. В прессе.

36.

Gerhardsson J, Sundelin B, Zickert A, Padyukov L, Svenungsson E, Gunnarsson I. Гистологическая антифосфолипид-ассоциированная нефропатия по сравнению с волчаночным нефритом у пациентов с системной красной волчанкой: обсервационное перекрестное исследование с длительным наблюдением .Артрит Res Ther. 2015;17:109. doi: 10.1186/s13075-015-0614-5.

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

37.

Jolly M, Francis S, Aggarwal R, Mikolaitis RA, Niewold TB, Chubinskaya S, et al. Легкие цепи, свободные от сыворотки, интерферон-альфа и интерлейкины при системной красной волчанке. волчанка. 2014; 23:881–8. дои: 10.1177/0961203314530793.

КАС Статья пабмед Google Scholar

38.

Kuan WP, Tam LS, Wong CK, Ko FWS, Li T, Zhu T и др. CXCL 9 и CXCL 10 как чувствительные маркеры активности заболевания у больных ревматоидным артритом. J Ревматол. 2010; 37: 257–64. дои: 10.3899/jrheum.0.

КАС Статья пабмед Google Scholar

39.

Gustafsson J, Gunnarsson I, Börjesson O, Pettersson S, Möller S, Fei GZ, et al. Предикторы первого сердечно-сосудистого события у больных системной красной волчанкой — проспективное когортное исследование.Артрит Res Ther. 2009;11:R186. дои: 10.1186/ar2878.

Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

40.

Somers EC, Zhao W, Lewis EE, Wang L, Wing JJ, Sundaram B, et al. Интерфероны типа I связаны с субклиническими маркерами сердечно-сосудистых заболеваний в когорте пациентов с системной красной волчанкой. ПЛОС Один. 2012;7, e37000. doi:10.1371/journal.pone.0037000.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

41.

Niewold TB, Hua J, Lehman TJA, Harley JB, Crow MK. Высокая активность IFN-α в сыворотке крови является наследственным фактором риска системной красной волчанки. Гены Иммун. 2007; 8: 492–502. doi: 10.1038/sj.gene.6364408.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

42.

Lood C, Blanco LP, Purmalek MM, Carmona-Rivera C, De Ravin SS, Smith CK, et al. Нейтрофильные внеклеточные ловушки, обогащенные окисленной митохондриальной ДНК, являются интерферогенными и способствуют развитию волчаночноподобного заболевания.Нат Мед. 2016;22:146–53. дои: 10.1038/nm.4027.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

43.

Mordstein M, Michiels T, Staeheli P. Что мы узнали от мыши с нокаутом рецептора IL28? J Интерферон Цитокин Res. 2010;30:579–84. doi: 10.1089/jir.2010.0061.

КАС Статья пабмед Google Scholar

44.

Диккеншитс Х., Шейх Ф., Парк О., Гао Б., Доннелли Р.П.Интерферон-лямбда (IFN-λ) индуцирует передачу сигнала и экспрессию генов в гепатоцитах человека, но не в лимфоцитах или моноцитах. Дж. Лейкок Биол. 2013;93:377–85. дои: 10.1189/jlb.0812395.

КАС Статья пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

45.

Feng X, Wu H, Grossman JM, Hanvivadhanakul P, FitzGerald JD, Park GS, et al. Ассоциация повышенной экспрессии генов, индуцируемых интерфероном, с активностью заболевания и волчаночным нефритом у пациентов с системной красной волчанкой.Ревмирующий артрит. 2006; 54: 2951–62. дои: 10.1002/арт.22044.

КАС Статья пабмед Google Scholar

Дипиритион ингибирует индуцированную IFN-γ активацию сигнального пути JAK/STAT1 и экспрессию IP-10/CXCL10 в клетках RAW264.7

Inflamm Res. 2010 г.; 59(10): 809–816.

, ¹, ¹, ¹, ¹, ², ⁹, ² и ⁹ и ¹

Cui Han

¹ Jiangsu провинция Ключ Лаборатории для молекулярной и медицинской биотехнологии, колледж жизни наук, Нанкинский педагогический университет, Нанкин, 210046 Китайская Народная Республика

Цзинь Фу

¹ Ключевая лаборатория молекулярной и медицинской биотехнологии провинции Цзянсу, Колледж наук о жизни, Нанкинский педагогический университет, Нанкин, 210046 Китайская Народная Республика

Ziwen Liu

¹ Ключевая лаборатория молекулярной и медицинской биотехнологии провинции Цзянсу, Колледж естественных наук, Нанкинский педагогический университет, Нанкин, 210046 Китайская Народная Республика

Huang Huang

² Государственная ключевая лаборатория биотехнологии, Фармацевтическая школа наук о жизни, Нанкинский университет, Нанкин, 210093 Китайская Народная Республика

Лань Luo

² Государственная ключевая лаборатория фармацевтической биотехнологии, Школа естественных наук, Нанкинский университет, Нанкин, 210093 Китайская Народная Республика

Zhimin Yin

¹ Ключевая лаборатория молекулярной биотехнологии и медицины провинции Цзянсу наук, Нанкинский педагогический университет, Нанкин, 210046 Китайская Народная Республика

² Государственный Ключевая лаборатория фармацевтической биотехнологии, Школа наук о жизни, Нанкинский университет, Нанкин, 210093 Китайская Народная Республика

Автор, ответственный за переписку.

Сообщение ответственного редактора: Л. Ли.

Поступила в редакцию 25 ноября 2009 г .; Пересмотрено 8 марта 2010 г.; Принято 22 марта 2010 г.

Эта статья доступна через подмножество открытого доступа PMC для неограниченного повторного использования в исследованиях и вторичного анализа в любой форме и любыми средствами со ссылкой на первоисточник. Эти разрешения выдаются на время объявления Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) COVID-19 глобальной пандемией.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Резюме

Цель

В этом исследовании изучается влияние дипиритиона (PTS2) на экспрессию IP-10/CXCL10, которое наблюдалось при широком спектре хронических воспалительных заболеваний и аутоиммунных состояний.

Методы

Клетки RAW264.7 (мышиная макрофагоподобная клеточная линия) культивировали в отсутствие или в присутствии PTS2 (3–10 мкМ) вместе с IFN-γ (10 нг/мл) или без него. Экспрессию IP-10/CXCL10 измеряли с помощью специфических иммуноферментных анализов и ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). Фосфорилирование JAK1, JAK2 и STAT1 детектировали вестерн-блоттингом.

Результаты

Мы обнаружили, что PTS2 ингибирует индуцированную IFN-γ повышающую регуляцию уровня белка IP-10/CXCL10 зависимым от дозы и времени образом в клетках RAW264.7. Эксперименты ОТ-ПЦР показали, что PTS2 подавлял индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10 на уровне мРНК. Механически PTS2 предотвращает фосфорилирование JAK1, JAK2 и STAT1, но не мешает пути p38. Кроме того, ингибирующее действие PTS2 на повышающую регуляцию IP-10/CXCL10 было немного сильнее, чем у ингибитора JAK2 AG490.

Заключение

PTS2 ингибирует индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10 в клетках RAW264.7 путем нацеливания на сигнальный путь JAK/STAT1, предполагая, что PTS2 может оказывать противовоспалительное действие за счет ослабления образования хемокина IP-10 /CXCL10.

Ключевые слова: Дипиритион, интерферон-γ, IP-10/CXCL10, передача сигналов JAK/STAT1, клетки RAW264.7 развитие острых и хронических воспалительных заболеваний. Интерферон-γ, секретируемый активированными Т-клетками и NK-клетками, тесно вовлечен во врожденный и приобретенный иммунный ответ [1–3]. Являясь основным фактором активации макрофагов, IFN-γ связывается со своим рецептором на поверхности клеток макрофагов и перепрограммирует экспрессию генов, необходимую для выполнения защитных функций хозяина, путем модулирования путей передачи сигнала. Белки, индуцированные IFN, включают ферменты, факторы транскрипции, гликопротеины клеточной поверхности, цитокины, хемокины и большое количество факторов с неизвестными функциями [4].

IP-10/CXCL10 представляет собой не-ELR (Glu-Leu-Arg) хемокин CXC, впервые клонированный в 1985 г. как белок, секретируемый мононуклеарными клетками периферической крови (PBMC), фибробластами и эндотелиальными клетками [5]. IP-10/CXCL10 связывается со своим рецептором CXCR3, чтобы играть биологическую роль в стимуляции моноцитов, миграции естественных киллеров (NK) и Т-клеток, регуляции созревания Т-клеток и предшественников костного мозга, модуляции экспансии молекул адгезии и ингибировании ангиогенеза [6]. –13]. Экспрессия IP-10/CXCL10 также наблюдалась при широком спектре хронических воспалительных заболеваний и аутоиммунных состояний [14–18].Недавно сообщалось, что SARS-CoV может вызывать чрезмерный иммунный ответ за счет перепроизводства IP-10/CXCL10, MCP-1 и IL-8, что приводит к трансэндотелиальной инфильтрации и накоплению нейтрофилов, альвеолярных макрофагов и Th2-лимфоцитов в легочной ткани, вызывая воспаление и деструкция легких [19]. Предыдущие исследования показали, что IP-10/CXCL10 может быть отличным прогностическим маркером прогрессирования заболевания SARS [20, 21]. IP-10/CXCL10 также индуцируется вирусом гепатита С (HCV) в гепатоцитах для рекрутирования воспалительных клеток в дольки и действует как важный предиктор прогрессирования хронической инфекции HCV [22].Таким образом, IP-10/CXCL10 рассматривается как прогностический маркер успешного ответа на лечение у пациентов с коинфекцией ВГС/ВИЧ [23]. Кроме того, Конг и соавт. [24] сообщили, что уровни IP-10/CXCL10 повышены при СКВ, и сывороточный IP-10/CXCL10 может представлять собой более чувствительный маркер для мониторинга активности заболевания, чем стандартные серологические тесты.

В различных клетках, включая макрофаги, внутриклеточный сигнальный путь, запускаемый рецепторами IFN-γ, включает быструю и непосредственную активацию сигнальных путей JAKs-STAT тирозиновых протеинкиназ Janus [2, 25–28].Было показано, что многочисленные биологические действия IFN-γ зависят от генных продуктов, связанных с путями передачи сигнала STAT1 [29]. Другим фактором транскрипции, участвующим в IFN-γ-индуцированной экспрессии IP-10/CXCL10, является ядерный фактор κB (NF-κB) [30]. Кроме того, было показано, что IFN-γ активирует сигнальный путь p38 для усиления экспрессии генов IP-10/CXCL10 в макрофагах [31].

Дипиритион (2,2′-дитиобиспиридин-1,1′-диоксид, PTS2) (номер CAS: 3696-28-4), производное пиритиона (PTO) (рис.), обладает антибактериальной и противогрибковой активностью. Описано влияние цвета кожи на чрескожное проникновение PTS2 у мужчин [32]. PTO, мономер PTS2, подавляющий рост грибков, дрожжей, плесени и бактерий, широко используется в косметике и шампунях. Недавно мы сообщили, что PTS2 индуцирует апоптоз клеток Hela посредством активации пути MAPK [33] и ингибирует индуцированную LPS повышающую регуляцию уровней белков iNOS и COX-2 и продукцию NO в клетках RAW264.7 [34]. Здесь мы приводим доказательства того, что PTS2 ингибирует индуцированную IFN-γ повышающую регуляцию IP-10/CXCL10 в RAW264.7 кл. Мы также обнаружили, что индуцированное IFN-γ повышение уровня мРНК IP-10/CXCL10 значительно подавлялось обработкой PTS2. Механизм, используемый PTS2 для предотвращения экспрессии IP-10/CXCL10, связан с его ингибирующим действием на трансдукцию сигнала JAK/STAT1, индуцированную IFN-γ. Эти результаты свидетельствуют о том, что PTS2 может влиять на иммунный ответ хозяина, подавляя экспрессию генов, индуцированную IFN-γ.

Химическая структура PTS2

Материалы и методы

Культура клеток

RAW264.7, мышиная макрофагоподобная клеточная линия, приобретенная в CBCAS (Банк клеток Китайской академии наук, Шанхай, Китай), содержалась в среде Игла, модифицированной Дульбекко (Invitrogen), с добавлением 10% (об. /об.) эмбриональной бычьей сыворотки ( Hyclone) и антибиотики (100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина) (HyClone) при 37°C в атмосфере 5% CO ₂ .

Антитела и реагенты

Поликлональные антитела против JAK1, фосфо-JAK1 (Tyr1022/1023), JAK2, фосфо-JAK2 (Tyr1007/1008), фосфо-STAT1 (Tyr701), p38 MAPK и фосфо-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) ) были получены от Cell Signaling Technology.Эти антитела разводили в соотношении 1:1000 в соответствии с протоколом. Антитело к STAT1 было получено от Santa Cruz Biotechnology, разведенное в соотношении 1:1500 в соответствии с протоколом. Все вторичные антитела, используемые для вестерн-блоттинга, были приобретены у Rockland Immunochemical. Рекомбинантный мышиный интерферон-γ (IFN-γ) был приобретен у Peprotech. AG490 (ингибитор JAK2) был приобретен у Calbiochem. PTS2 был приобретен у J&K Chemical Ltd.

IP-10/CXCL10 ELISA

RAW264.7 клеток высевали в 24-луночные планшеты в количестве 5 × 10 ⁵ клеток/лунку за день до эксперимента. После обработки IFN-γ и PTS2 среды собирали и центрифугировали при 10 000 об/мин в течение 5 мин. Затем определяли уровень IP-10/CXCL10 в среде с помощью количественного сэндвич-иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием специфичного для мышей IP-10/CXCL10 ELISA (R&D Systems) в соответствии с инструкциями производителя.

Вестерн-блоттинг

Клетки дважды промывали ледяным PBS и солюбилизировали в буфере для лизиса, содержащем 20 мМ Трис (pH 7.5), 135 мМ NaCl, 2 мМ ЭДТА, 2 мМ ДТТ, 25 мМ β-глицерофосфат, 2 мМ пирофосфат натрия, 10 % глицерин, 1 % Тритон Х-100, 1 мМ ортованадат натрия, 10 мМ NaF, 10 мкг/мл. апротинина, 10 мкг/мл лейпептина и 1 мМ фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ) в течение 30 минут на льду. Лизаты центрифугировали (15 000 × г ) при 4°C в течение 10 мин. Равные количества растворимого белка денатурировали в SDS, подвергали электрофорезу на 12% SDS-полиакриламидном геле и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. Иммуноблоттинг проводили, как описано [35]. Вторичные антитела IgG, конъюгированные с IRdye 800, использовали против соответствующих первичных антител. Белки визуализировали с помощью системы инфракрасной визуализации Odyssey (LI-COR).

ПЦР с обратной транскриптазой

Суммарную РНК экстрагировали реагентом Trizol (Gibco), как описано производителем. ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) проводили с использованием набора Access RT-PCR System (Promega) в соответствии с протоколом с указанными праймерами (IP-10/CXCL10: смысловой праймер 5′-gtcatttttctgcctcatcct-3′, антисмысловой праймер 5′- gagcccttttagaccttttt-3′; глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (GAPDH): смысловой праймер 5′-tgaaggtcggtgtgaacggatttggc-3′, антисмысловой праймер 5′-tggttcacacccatcacaaacatgg-3′).ПЦР проводили в течение 30 циклов в 25 мкл реакционной смеси. Продукты ПЦР визуализировали в 1,2% агарозных гелях, окрашенных EtBr. GAPDH использовали в качестве гена домашнего хозяйства, где это было указано.

Статистика

Дисперсионный анализ (ANOVA) использовался для сравнения результатов между двумя группами. Отдельные точки сравнивались с использованием теста Стьюдента t (STATISTICA, Statsoft Inc., Талса, США), и различия считались значимыми для P < 0,01. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.Эксперименты по вестерн-блоттингу повторяли три раза с аналогичными тенденциями.

Результаты

PTS2 ингибирует IFN-γ-индуцированную активацию IP-10/CXCL10 в клетках RAW 264.7

мы измеряли уровень IP-10/CXCL10 в культуральной среде клеток RAW264.7 методом ELISA. Мы предварительно обработали клетки RAW264.7 0, 3,0, 5,0 или 10,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов, а затем стимулировали клетки IFN-γ (10 нг/мл) в течение 24 часов с последующим сбором среды.Результат анализа ELISA показал, что IFN-γ резко стимулировал секрецию IP-10/CXCL10, а PTS2 дозозависимо ингибировал повышение уровня IP-10/CXCL10 со значительным снижением при дозах 5,0 и 10,0 мкМ. Один только PTS2, даже в концентрации 10,0 мкМ, не влиял на уровень белка IP/CXCL10 в нормальных клетках RAW264. 7 (рис. а).

Влияние PTS2 на индуцированную IFN-γ повышающую регуляцию уровня белка IP-10/CXCL10 в клетках RAW264.7. Клетки и RAW264.7 были предварительно обработаны 3.0, 5,0 или 10,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет, а затем стимулировали IFN-γ (10 нг/мл) в течение 24 часов. b Клетки предварительно обрабатывали 5,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет, а затем стимулировали IFN-γ (10 нг/мл) в течение 0–24 часов соответственно. c Клетки предварительно обрабатывали 5,0 мкМ PTS2, PTO или аспирином в течение 2 часов с последующей инкубацией с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 24 часов. Супернатанты клеточных культур от a , b и c подвергали ELISA для измерения уровня белка IP-10/CXCL10.Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ** P < 0,01 по сравнению с клетками, стимулированными IFN-γ

Дальнейшие эксперименты проводили путем обработки клеток RAW264. 7 5,0 мкМ PTS2 в течение 2 ч или нет с последующей инкубацией этих клеток с IFN-γ (10 нг /мл) в течение 0–24 ч. Супернатанты клеточных культур подвергали анализу ELISA для измерения уровня белка IP-10/CXCL10. Как показано на рис. b, уровень белка IP-10/CXCL10, по-видимому, увеличился через 8, 12 и 24 ч после стимуляции IFN-γ, тогда как обработка PTS2 привела к снижению индуцированной IFN-γ активизации IP-10/CXCL10.Мы также обнаружили ингибирующую способность PTO, мономера PTS2, на индуцированную IFN-γ активацию IP-10/CXCL10. Клетки RAW264.7 обрабатывали PTO (5,0 мкМ) или PTS2 (5,0 мкМ) в течение 2 часов, а затем стимулировали IFN-γ (10 нг/мл) в течение 24 часов. Сравнивая PTS2 с PTO, мы обнаружили, что PTS2 был немного более эффективным в ингибировании индуцированной IFN-γ экспрессии IP-10/CXCL10. Кроме того, в качестве контроля использовали аспирин, который представляет собой ацетилированный салицилат, используемый для лечения воспаления и боли при артрите [36]. Данные свидетельствуют о том, что аспирин не влияет на индуцированную IFN-γ активацию IP-10/CXCL10 (фиг. в).

PTS2 ингибирует вызванное IFN-γ повышение уровня мРНК IP-10/CXCL10 в клетках RAW 264.7 выполнили RT-PCR для анализа влияния PTS2 на индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10 на уровнях транскрипции. Клетки RAW264.7 предварительно обрабатывали PTS2 (5,0 мкМ) в течение 2 часов или нет, а затем стимулировали IFN-γ (10 нг/мл). Через двенадцать часов после стимуляции IFN-γ выделяли общую РНК и определяли уровень мРНК IP-10/CXCL10 с помощью RT-PCR.Как показано на рис. , стимуляция IFN-γ повышала уровни эндогенной мРНК IP-10/CXCL10, тогда как PTS2 подавлял индуцированное IFN-γ повышение уровней мРНК IP-10/CXCL10. Ген домашнего хозяйства GAPDH не изменился при лечении. Этот результат вместе с данными, показанными выше на фиг. , продемонстрировал, что PTS2 ингибировал индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10.

Влияние PTS2 на индуцированное IFN-γ повышение уровня мРНК IP-10/CXCL10 в клетках RAW264.7. Клетки предварительно обрабатывали 5,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет, после чего инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 12 часов. Тотальную РНК выделяли и определяли мРНК IP-10/CXCL10 с помощью ОТ-ПЦР. мРНК GAPDH использовали в качестве контроля. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ** P < 0,01 по сравнению со стимулированными IFN-γ контрольными клетками

PTS2 предотвращает индуцированную IFN-γ передачу сигналов JAK/STAT1 в клетках RAW 264.7

Было продемонстрировано, что активация транскрипции IP-10/ Ген CXCL10 зависит от IFN-γ-индуцированной активации передачи сигналов JAK/STAT1 [29]. Таким образом, мы оценили влияние PTS2 на индуцированную IFN-γ активацию JAK1, JAK2 и STAT1 в RAW264.7 кл. Клетки предварительно обрабатывали 3,0, 5,0, 10,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет, а затем инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 30 минут. Вестерн-блоттинг показал, что JAK1, JAK2 и STAT1 заметно активировались при стимуляции IFN-γ, тогда как обработка PTS2 приводила к снижению индуцированного IFN-γ фосфорилирования JAK1, JAK2 и STAT1 в зависимости от концентрации (рис. а). Затем клетки RAW264.7 обрабатывали PTS2 (5,0 мкМ) в течение 2 часов или нет, а затем инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 0–60 минут.По оценке вестерн-блоттинга, IFN-γ быстро (в течение 3 мин) увеличивал фосфорилирование остатков тирозина 1022/1023 JAK1 и 1007/1008 JAK2, а также тирозина 701 STAT1 (рис. b). PTS2 снижал фосфорилирование JAK1, JAK2 и STAT1 в зависимости от времени (рис. b). Когда клетки RAW264.7 обрабатывали различными концентрациями IFN-γ (1–10 нг/мл), наблюдалось резкое и зависимое от концентрации фосфорилирование JAK1, JAK2 и STAT1 (рис. c). PTS2 значительно ослаблял индуцированное IFN-γ фосфорилирование JAK1, JAK2 и STAT1 (фиг.c), тогда как на количество общих белков JAK1, JAK2 и STAT1 в клетках RAW264.7 не влияла обработка как IFN-γ, так и PTS2 (рис. a–c). Предыдущие сообщения показали, что селективный фармакологический ингибитор JAK2 AG490 может значительно ингибировать повышенную экспрессию хемокинов, индуцированную IFN-γ, в мезангиальных клетках мыши [29]. Поэтому мы сравнили влияние PTS2 и AG490 на индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10. Клетки RAW264.7 предварительно обрабатывали PTS2 (5,0 мкМ) или AG490 (30,0 мкМ) или обоими из них соответственно в течение 2 часов, а затем инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 24 часов.Супернатанты клеточных культур подвергали анализу ELISA для измерения уровней белка IP-10/CXCL10. Как показано на рисунке d, PTS2 в концентрации 5,0 мкМ оказался более эффективным в подавлении индуцированной IFN-γ экспрессии IP-10/CXCL10, чем 30,0 мкМ AG490. Кроме того, индуцированная IFN-γ экспрессия IP-10/CXCL10 в клетках, совместно инкубированных с PTS2 и AG490, была ниже, чем в клетках, обработанных либо PTS2, либо AG490. В совокупности эти результаты свидетельствуют о том, что PTS2 ингибировал индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10 в RAW 264.7 за счет подавления активации сигнального пути JAK/STAT1.

Влияние PTS2 на индуцированную IFN-γ передачу сигналов JAK/STAT1 в клетках RAW 264.7. Клетки и RAW264.7 предварительно обрабатывали 3,0, 5,0 или 10,0 мкМ PTS2 или нет соответственно в течение 2 часов, а затем инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 30 минут. Вестерн-блот-анализ проводили с использованием антител к JAK1, p-JAK1, JAK2, p-JAK2, STAT1 или p-STAT1 соответственно. GAPDH использовали в качестве контроля. b Клетки инкубировали с PTS2 (5.0 мкМ) в течение 2 ч или нет с последующей стимуляцией IFN-γ (10 нг/мл) в течение 0–60 мин соответственно. Клеточные лизаты подвергали вестерн-блоттингу. c Клетки предварительно обрабатывали 5,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет, а затем стимулировали различными концентрациями IFN-γ (1–10 нг/мл). d Клетки предварительно обрабатывали PTS2 (5,0 мкМ), AG490 (30,0 мкМ) или обоими из них соответственно в течение 2 часов, а затем инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 24 часов. Супернатанты клеточных культур подвергали анализу ELISA для измерения уровня белка IP-10/CXCL10.Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. ** P < 0,01 по сравнению с контрольными клетками, стимулированными IFN-γ

Доза PTS2 не влияет на активацию p38, индуцированную IFN-γ

Сообщается, что P38 играет критическую роль в регуляции экспрессии ряда цитокины и хемокины, включая IP-10/CXCL10, при стимуляции IFN-γ в макрофагах [31]. Таким образом, мы оценили влияние PTS2 на индуцированную IFN-γ активацию p38 в клетках RAW264.7. Клетки предварительно обрабатывали 5,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет, а затем инкубировали с IFN-γ (10 нг/мл) в течение 0–1.5 ч соответственно. На рисунке показано, что индуцированное IFN-γ фосфорилирование p38 достигло максимума через 0,5 ч после обработки IFN-γ, и предварительная обработка PTS2 не влияла на эту активацию p38.

Влияние PTS2 на индуцированную IFN-γ активацию p38. Клетки RAW264.7 предварительно обрабатывали 5,0 мкМ PTS2 в течение 2 часов или нет с последующей инкубацией с 10 нг/мл IFN-γ в течение 0–1,5 часов. Вестерн-блоттинг проводили с использованием антител к р38 или р-р38. GAPDH использовали в качестве контроля. Результаты были репрезентативными для трех независимых экспериментов

Обсуждение

Ряд стероидных агентов, таких как глюкокортикоиды, использовались в качестве противовоспалительных препаратов в течение длительного времени, но частая ассоциация с серьезными побочными эффектами, такими как повреждение печени, рак , инсульт и остановка роста, были давней дилеммой в клинической стероидной противовоспалительной терапии. Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) представляют собой один из наиболее широко используемых классов лекарственных средств, включая аспирин, индометацин, фенилбутазон и др. антицитокиновые средства [37]. Некоторые производные пиридина, такие как пироксин и сульфасалазин, известны своим противовоспалительным действием. Как член семейства пиридинтионовых соединений, PTS2 долгое время использовался в качестве бактерицида, пестицида и фунгицида [38].Однако сравнительно меньше исследований было посвящено противовоспалительной активности и механизмам PTS2.

IFN-γ является ключевым цитокином, участвующим в синергическом развитии многих воспалительных реакций. Активированные Т-лимфоциты и NK-клетки продуцируют IFN-γ, который является основным фактором активации макрофагов. Активация JAK1, JAK2 и STAT1 играет центральную роль в первичной транскрипционной реакции на IFN-γ [2, 28]. Хорошо документировано, что избыточное высвобождение IFN-γ может приводить к гиперэкспрессии IP-10/CXCL10, которая регулирует почти все стадии развития воспаления, в частности, раннюю стадию трансмиграции Т-клеток и NK-клеток в очаги воспаления. [2].Некоторые лекарства, такие как глюкокортикоиды, которые снижают частоту воспалительных процессов, проявляют ингибирующее действие на экспрессию IP-10/CXCL10, а некоторые химические вещества с эффективностью ингибирования сверхэкспрессии IP-10/CXCL10 также считаются обладающими огромным потенциалом для лечение широкого спектра воспалительных заболеваний, включая ОРВИ, хронический гепатит С, СКВ и др. [20, 39, 40].

В этом исследовании мы сосредоточились на влиянии PTS2 на экспрессию IP-10/CXCL10, индуцируемого IFN-γ хемокина, регуляция транскрипции которого в основном зависит от активации сигнального пути JAK/STAT1.Сакаэда и др. [41] показали, что IFN-γ стимулирует экспрессию IP-10/CXCL10 в клетках RAW264.7. В текущем исследовании мы продемонстрировали, что индуцированная IFN-γ повышающая регуляция IP-10/CXCL10 в клетках RAW264.7 ингибировалась PTS2 в зависимости от дозы и времени. Хотя IFN-γ индуцирует быстрое фосфорилирование тирозина JAK1 и JAK2 и активацию STAT1 в клетках RAW264. 7, при обработке клеток IFN-γ в присутствии PTS2 активация JAK/STAT1 подавлялась. Более того, мы обнаружили, что ингибирующий эффект PTS2 на повышающую регуляцию IP-10/CXCL10 был немного сильнее, чем у ингибитора JAK2 AG490 при RAW264.7 клеток, совместно инкубированных с PTS2 и AG490, показали заметное снижение IP-10/CXCL10, что свидетельствует о синергическом эффекте PTS2 и AG490. Эти результаты показывают, что PTS2 ингибирует индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10 посредством предотвращения активации сигнального пути JAK/STAT1. Подобный результат, обнаруженный в нашем недавнем отчете, указывает на то, что PTS2 ингибирует индуцированную LPS экспрессию iNOS путем подавления фосфорилирования STAT1 в клетках RAW264.7 [34]. Было продемонстрировано, что активация p38, по-видимому, играет критическую роль в регуляции экспрессии ряда хемокинов и цитокинов, индуцированных IFN-γ в макрофагах [31], но в настоящем исследовании PTS2 не изменял IFN-γ. -индуцированное фосфорилирование p38.Маджумдер и др. [42] показали, что индукция IP-10/CXCL10 зависела от ISRE (стимулируемого интерфероном элемента ответа) и одного из двух сайтов узнавания NF-κB. Мы также попытались изучить влияние PTS2 на передачу сигналов NF-κB, однако мы не обнаружили активации NF-κB при стимуляции IFN-γ посредством обнаружения убиквитинирования IκBα и IκBβ в клетках RAW264.7 (данные не показаны). Результат согласуется с результатами о том, что NF-κB может регулировать экспрессию IP-10/CXCL10, но IFN-γ не активирует NF-κB как у Myd88, так и у ^-/- и макрофаги дикого типа [43].Кроме того, наша работа также указывает на то, что PTS2 не оказывает существенного влияния на жизнеспособность клеток (данные не показаны).

В заключение, наше исследование демонстрирует, что PTS2 подавляет индуцированную IFN-γ экспрессию IP-10/CXCL10 посредством ослабления активации сигнальных путей JAK/STAT1. Это открытие дает новое понимание противовоспалительной активности и клинического терапевтического потенциала PTS2 и других производных пиридина.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (No.30770842 и 30771979), Крупный фонд естественных наук Цзянсу для высшего образования (№ 07KJA18026) и Специализированный исследовательский фонд для докторской программы высшего образования Китая (2007104SBJ0152).

Сокращения

PtS2	Dipyrithione
ИФН-γ	Интерферон гамма-
IP-10	ИФН-γ-индуцируемый белок-10
GAPDH	Glyceralde-Hyde -3-фосфат дегидрогеназа
JAK	JANUS белок тирозин кинасе
stat1		stat1	сигнальные преобразователи и активаторы транскрипции 1
NF-κB	ядерный фактор κB
MTT	3 -(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид

Информация для участников

Lan Luo, тел. : +86-25-83686657, факс: +86-25-83686657, электронная почта: нк.ude.ujn@oulnal.

Жимин Инь, тел.: +86-25-858, факс: +86-25-858, электронная почта: nc.ude.unjn@nimihzniy.

Ссылки

1. Platanias LC. Интерфероны: от лабораторных до клинических исследований. Curr Opin Oncol. 1995; 7: 560–565. doi: 10.1097/00001622-199511000-00015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]2. Старк Г.Р., Керр И.М., Уильямс Б.Р., Сильверман Р.Х., Шрайбер Р.Д. Как клетки реагируют на интерфероны. Анну Рев Биохим. 1998; 67: 227–264. doi: 10.1146/annurev.biochem.67.1.227. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3.Бем Ю., Кламп Т., Гроот М., Ховард Дж. К. Клеточные ответы на интерферон-γ Ann Rev Immunol. 1997; 15: 749–795. doi: 10.1146/annurev.immunol.15.1.749. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4. Омори Ю., Гамильтон Т.А. Регуляция экспрессии генов макрофагов лимфокином Т-клеточного происхождения. Pharmacol Ther (Оксфорд) 1994;63:235–264. [PubMed] [Google Scholar]5. Lustre AD, Unkeless JC, Ravetch JV.

Гамма-интерферон транскрипционно регулирует ген раннего ответа, гомологичный белкам тромбоцитов. Природа.1985; 315: 672–676. дои: 10.1038/315672a0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6. Невилл Л.Ф., Матиак Г., Багасра О. Иммунобиология интерферон-гамма-индуцируемого белка 10 кДа (IP-10): новый плейотропный член надсемейства хемокинов CXC. Cytokine Growth Factor Rev. 1997; 8:207–219. doi: 10.1016/S1359-6101(97)00015-4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Lazzeri E, Romagnani P. CXCR3-связывающие хемокины: новые многофункциональные терапевтические мишени. Curr Drug нацелен на нарушение метаболизма эндокринных желез.2005; 5: 109–118. doi: 10.2174/1568008053174723. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Kiseier BC, Tani M, Mahad D, Oka N, Ho T, Woodroofe N, Griffin JW, Toyka KV, Ransohoff RM, Hartung HP. Хемокины и хемокиновые рецепторы при воспалительных демиелинизирующих невропатиях: центральная роль IP-10. Головной мозг. 2002; 125:823–834. doi: 10.1093/brain/awf070. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9.

Лю М.Т., Чен Б.П., Ортель П., Бухмайер М.Дж., Армстронг Д., Гамильтон Т.А., Лейн Т.Э. Белок 10, индуцируемый IFN-хемоаттрактантом Т-клеток, необходим для защиты хозяина от вирусно-индуцированного неврологического заболевания.Дж Иммунол. 2000;165:2327–2330. [PubMed] [Google Scholar] 10. Олсон Т.С., Лей К. Хемокины и хемокиновые рецепторы в транспортировке лейкоцитов. Am Physiol Soc. 2002; 283:7–28. [PubMed] [Google Scholar] 11. Arai K, Liu ZX, Lane T. Dennert G IP-10 и Mig способствуют накоплению Т-клеток в инфицированной вирусом печени. Клеточный Иммунол. 2002; 219:48–56. doi: 10.1016/S0008-8749(02)00584-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Ветцель М.А., Стил А.Д., Хендерсон Э.Е., Роджерс Т.Дж. Влияние X4 и R5 ВИЧ-1 на хемокины C, CC и CXC на ранних стадиях инфекции в РВМС человека.Вирусология. 2002; 292:6–15. doi: 10.1006/viro.2001.1249. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Agostini C, Facco M, Siviero M, Carollo D, Galvan S, Cattelan AM, Zambello R, Trentin L, Semenzato G.

Экспрессия хемокинов CXC IP-10 и Mig и прямая миграция легочных CD8+/CXCR3+ Т-клеток в легкие пациентов с ВИЧ-инфекцией и Т-клеточным альвеолитом. Am J Respir Crit Care Med. 2000; 162:1466–1473. [PubMed] [Google Scholar] 14. Rotondi M, Lazzeri E, Romagnani P, Serio M. Роль индуцируемых гамма-интерфероном хемокинов в эндокринном аутоиммунитете: расширяющаяся область.J Endocrinol Investig. 2003; 26: 177–180. [PubMed] [Google Scholar] 15. Кристен У, фон Херрат М.Г. IP-10 и диабет 1 типа: вопрос времени и места. Аутоиммунитет. 2004; 37: 273–282. doi: 10.1080/08916930410001713124. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Ханаока Р., Касама Т., Мурамацу М., Ядзима Н., Шиодзава Ф., Мива Й., Негиши М., Идэ Х., Мияока Х., Учида Х., Адачи М. Новый механизм регуляции экспрессии белка-10, индуцируемого интерфероном-гамма, при ревматоидном артрите. артрит. Артрит Res Ther.2003; 5:74–81. doi: 10.1186/ar616. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]17. Azzurri A, Sow OY, Amedei A, Bah B, Diallo S, Peri G, Benagiano M, D’Elios MM, Mantovani A, Del Prete G.

Интерферон-гамма-индуцируемый белок 10 и уровни пентраксина 3 в плазме являются инструментами для мониторинга воспаления. и активность заболевания при инфекции Mycobacterium tuberculosis. микробы заражают. 2005; 7:1–8. doi: 10.1016/j.micinf.2004.09.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Ромеро А.И., Лаггинг М., Вестин Дж., Диллон А.П., Дастин Л.Б., Павлоцкий Дж.М., Нойманн А.Ю., Феррари С., Миссале Г., Хаагманс Б.Л., Шальм С.В., Цойзем С., Негро Ф., Харт Э.В., Хеллстранд К.Интерферон (ИФН)-гамма-индуцируемый белок-10: связь с гистологическими результатами, вирусной кинетикой и исходом при лечении пегилированным ИФН-альфа 2а и рибавирином при хронической вирусной инфекции гепатита С. J заразить дис. 2006; 194:895–903. дои: 10.1086/507307. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Хуан К.Дж., Су И.Дж., Терон М., Ву Ю.С., Лай С.К., Лю К.С., Лей Х.И. Цитокиновый шторм, связанный с гамма-интерфероном, у пациентов с атипичной пневмонией. J Med Virol. 2005; 75: 185–194. doi: 10.1002/jmv.

20255. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]20.Jiang Y, Xu J, Zhou C, Wu Z, Zhong S, Liu J, Luo W, Chen T, Qin Q, Deng P. Характеристика профилей цитокинов/хемокинов при тяжелом остром респираторном синдроме. Am J Respir Crit Care Med. 2005; 171: 850–857. doi: 10.1164/rccm.200407-857OC. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Тан Н.Л., Чан П.К., Вонг К.К., То К.Ф., Ву А.К., Сун Ю.М., Хуэй Д.С., Сун Д.Дж., Лам К.В. Ранняя повышенная экспрессия интерферон-индуцируемого белка-10 (CXCL-10) и других хемокинов предсказывает неблагоприятный исход при тяжелом остром респираторном синдроме.Клин Хим. 2005; 51: 233–240. doi: 10.1373/clinchem.2005.054460. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]22. Харви К.Е., Пост Дж.Дж., Палладинетти П., Фриман А.Дж., Френч Р.А., Кумар Р.К., Маринос Г., Ллойд А.Р. Экспрессия хемокина IP-10 (CXCL10) гепатоцитами при хронической инфекции, вызванной вирусом гепатита С, коррелирует с гистологической тяжестью и очаговым воспалением.

Дж. Лейкок Биол. 2003; 74: 360–369. doi: 10.1189/jlb.0303093. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Зеремски М., Маркату М., Браун К.Б., Доранте Г., Каннингем-Рандлс С., Талал А.Х.Прогностический маркер успешного ответа на лечение у пациентов с коинфекцией вирусом гепатита С/ВИЧ. Приобретите синдром иммунодефицита. 2007; 45: 262–268. [PubMed] [Google Scholar] 24. Kong KO, Tan AW, Thong BYH, Lian TY, Cheng YK, Teh CL, Koh ET, Leong KP, Leung BP, Howe HS. Повышенная экспрессия интерферон-индуцируемого белка-10 коррелирует с активностью заболевания и клиническими проявлениями системной красной волчанки. Клин Эксп Иммунол. 2009; 156: 134–140. doi: 10.1111/j.1365-2249.2009.03880.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]25.Шуай К. Активируемая интерфероном передача сигнала в ядро. Curr Opin Cell Biol. 1994; 6: 253–259. doi: 10.1016/0955-0674(94)

-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Лиман Д.В., Леунг С., Ли Х, Старк Г.Р. Регуляция STAT-зависимых путей факторами роста и цитокинами.

FASEB J. 1996; 10: 1578–1588. [PubMed] [Google Scholar] 27. Леонард В.Дж., О’Ши Дж.Дж. ДЖАКС И СТАТИСТИКА: биологические последствия. Энн Рев Иммунол. 1998; 16: 293–322. doi: 10.1146/annurev.immunol.16.1.293. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Рамана К.В., Чаттерджи-Кишор М., Нгуен Х., Старк Г.Р. Сложные роли Stat1 в регуляции экспрессии генов. Онкоген. 2000;19:2619–2627. doi: 10.1038/sj.onc.1203525. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Panzer U, Zahner G, Wienberg U, Steinmetz OM, Peters A, Turner JE, Paust HJ, Wolf G, Stahl RA, Schneider A. 15-дезокси-12, 14-простагландин J2 ингибирует IFN-γ-индуцированную передачу сигналов JAK/STAT1. активация пути и экспрессия IP-10/CXCL10 в мезангиальных клетках. Трансплантация нефролового циферблата. 2008; 23:3776–3785. дои: 10.1093/ndt/gfn361. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Деб А., Хак С.Дж., Могенсен Т., Сильверман Р.Х., Уильямс Б.Р. РНК-зависимая протеинкиназа PKR необходима для активации NF-κB с помощью IFN-γ в STAT1-независимом пути.

Дж Иммунол. 2001; 166:6170–6180. [PubMed] [Google Scholar] 31. Валледор А. Ф., Санчес-Тилло Э., Арпа Л., Парк Дж. М., Каэльес С., Льоберас Дж., Селада А. Избирательные роли МАРК во время ответа макрофагов на IFN-гамма. Дж Иммунол. 2008; 180:4523–4529. [PubMed] [Google Scholar] 32. Ведиг Дж. Х., Майбах HI.Чрескожное проникновение PTS2 в человека: влияние цвета кожи (раса) J Am Acad Dermatol. 1981; 5: 433–438. doi: 10.1016/S0190-9622(81)70105-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Фан Ю.М., Чен Х., Цяо Б., Луо Л., Ма Х., Ли Х., Цзян Д.Х., Ню Д.З., Инь З.М. Противоположные эффекты киназ ERK и p38 MAP на апоптоз клеток HeLa, индуцированный дипиритионом. Мол Ячейка. 2007; 23:30–38. [PubMed] [Google Scholar] 34. Лю З.В., Фань Ю.М., Ван И, Хань С., Пан И, Хуан Х., Е И., Ло Л., Инь З.М. Дипиритион ингибирует индуцированную липополисахаридами активацию iNOS и ЦОГ-2 в макрофагах и защищает от эндотоксического шока у мышей.ФЭБС лат. 2008; 582:1643–1650. doi: 10.1016/j.febslet.2008.04.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35.

У Ю.Ф., Фан Ю.М., Сюэ Б., Луо Л., Шэнь Ю.Й., Чжан С.Й., Цзян И., Инь З.М. Глутатион-S-трансфераза P1-1 человека взаимодействует с TRAF2 и регулирует сигналы TRAF2-ASK1. Онкоген. 2006; 25: 5787–5800. doi: 10.1038/sj.onc.1209576. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Макконки Б., Кроксон Р.А., Кроксон А.П., Уилкинсон А.Р. Влияние некоторых противовоспалительных препаратов на острофазовые белки при ревматоидном артрите.QJM. 1973; 42: 785–791. [PubMed] [Google Scholar] 37. Рейнсфорд КД. Противовоспалительные препараты в 21 веке. Субклеточная биохимия. 2007; 42:3–27. doi: 10.1007/1-4020-5688-5_1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Малхотра Г.Г., Зац Дж.Л. Исследование усиления проницаемости ногтей путем химической модификации с использованием воды в качестве зонда. Дж. Фарм. 2002; 91: 312–323. doi: 10.1002/jps.10058. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39. Келли В.Р., Ровин Б.Х. Хемокины: терапевтические мишени при аутоиммунных и воспалительных заболеваниях почек.Иммунопатология Спрингера Семина.

2003; 24:411–421. doi: 10.1007/s00281-003-0124-4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]40. Зеремски М., Петрович Л.М., Чирибога Л., Браун К.Б., Йи Х.Т., Кинхабвала М., Якобсон И.М., Димова Р., Маркату М., Талал А.Х. Внутрипеченочные уровни CXCR3-ассоциированных хемокинов коррелируют с воспалением и фиброзом печени при хроническом гепатите С. Гепатология. 2008;48:1440–1450. doi: 10.1002/hep.22500. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]41. Сакаэда Ю., Хирои М., Симодзима Т., Игучи М., Канегаэ Х., Омори Ю.Сулиндак, нестероидный противовоспалительный препарат, селективно ингибирует индуцированную интерфероном-γ экспрессию гена хемокина CXCL9 в макрофагах мыши. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 350:339–344. doi: 10.1016/j.bbrc.2006.09.058. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]42. Маджумдер С., Чжоу Л.Ж., Чатурведи П., Бэбкок Г., Арас С., Рансохофф Р.М. Комплексы, содержащие p48/STAT-1α, играют преобладающую роль в индукции IFN-γ-индуцируемого белка 10 кДа (IP-10) с помощью IFN-γ отдельно или в синергии с TNF-α J Immunol.

1998; 161:4736–4744. [PubMed] [Google Scholar]43. Sun D, Ding A. MyD88-опосредованная стабилизация мРНК цитокинов и хемокинов, индуцированных интерфероном-γ. Натура Иммунол. 2006; 7: 375–381. дои: 10.1038/ni1308. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Патогенез и лечение «цитокинового шторма» при COVID-19

J Infect. 2020 июнь; 80(6): 607–613.

Национальный центр клинических исследований здоровья детей, Национальный детский региональный медицинский центр, Детская больница, Медицинский факультет Чжэцзянского университета, № 3333, Binsheng Road, Ханчжоу 310052, Китай

Поступила в редакцию 20 марта 2020 г.; Принято 24 марта 2020 г.

С января 2020 года Elsevier создал ресурсный центр COVID-19 с бесплатной информацией на английском и китайском языках о новом коронавирусе COVID-19. Ресурсный центр COVID-19 размещен на Elsevier Connect, общедоступном новостном и информационном веб-сайте компании. Настоящим Elsevier разрешает сделать все свои исследования, связанные с COVID-19, которые доступны в ресурсном центре COVID-19, включая этот исследовательский контент, немедленно доступными в PubMed Central и других финансируемых государством репозиториях, таких как база данных COVID ВОЗ с правами на неограниченное повторное использование в исследованиях и анализы в любой форме и любыми средствами с указанием первоисточника.Эти разрешения предоставляются компанией Elsevier бесплатно до тех пор, пока ресурсный центр COVID-19 остается активным.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Резюме

Цитокиновый шторм — это общий термин, применяемый к неадекватному высвобождению цитокинов в ответ на инфекцию и другие стимулы. Патогенез сложен, но включает потерю регуляторного контроля продукции провоспалительных цитокинов как на местном, так и на системном уровнях. Заболевание быстро прогрессирует, смертность высока.Некоторые данные показывают, что во время эпидемии коронавирусной болезни 2019 года (COVID-19) тяжелое ухудшение состояния у некоторых пациентов было тесно связано с нарушением регуляции и чрезмерным высвобождением цитокинов. В этой статье рассматривается то, что мы знаем о механизме и стратегиях лечения воспалительного шторма, вызванного вирусом COVID-19, в попытке предоставить некоторую основу для информирования будущих рекомендаций по клиническому лечению.

Ключевые слова: Коронавирус, 2019-nCoV, SARS-CoV-2, Цитокиновый шторм, Иммуномодуляция , в декабре 2019 г.Это тип высокопатогенного коронавируса человека (HCoV), который вызывает зоонозные заболевания и представляет серьезную угрозу для здоровья населения. Подавляющее большинство пациентов с коронавирусной болезнью 2019 года (COVID-19) имели хороший прогноз, но все же были некоторые критические состояния и даже летальные исходы.1

У большинства из этих тяжелобольных и умерших пациентов не развивались тяжелые клинические проявления на ранних стадиях заболевания. У некоторых пациентов наблюдалась лишь легкая лихорадка, кашель или болезненность мышц.Состояние этих больных резко ухудшалось на поздних стадиях болезни или в процессе выздоровления. Острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС) и полиорганная недостаточность развивались быстро, приводя к смерти в течение короткого промежутка времени. Цитокиновый шторм считается одной из основных причин ОРДС и полиорганной недостаточности.3 Он играет важную роль в процесс обострения заболевания.4 Клинические исследования выявили цитокиновый шторм у критических пациентов с COVID-19. Поэтому эффективное подавление цитокинового шторма является важным способом предотвращения ухудшения состояния пациентов с инфекцией COVID-19 и спасения их жизни.5 В этой статье рассматриваются механизмы, с помощью которых инфекция HCoV вызывает цитокиновый шторм, и варианты подавления цитокинового шторма, чтобы предоставить справочную информацию по клинической диагностике и лечению COVID-19.

HCoV

Коронавирусы (CoV) представляют собой одноцепочечные вирусы с положительной цепью РНК, принадлежащие к семейству Coronaviridae, отряду Nidovirales. Международный комитет по таксономии вирусов (ICTV) классифицирует CoV на четыре категории: α, β, γ и δ. Под электронным микроскопом вирусные частицы имеют грубую сферическую или многогранную кристаллическую форму.Поверхность вирусов имеет заметные булавовидные выступы, состоящие из шиповидного белка. Внутри вирусной частицы находится вирусный геном, завернутый в нуклеокапсид. Вирусный геном содержит примерно от 26 000 до 32 000 оснований. CoVs являются крупнейшими известными РНК-содержащими вирусами. Вирусная РНК с положительной цепью состоит из кэп-структуры на 5′-конце и множества поли(А)-хвостов на 3′-конце. Он служит матричной РНК (мРНК), обеспечивая трансляцию репликазы/транскриптазы и вирусных структурных белков.Гены репликазы/транскриптазы составляют примерно 2/3 5′-концевой последовательности РНК и состоят из двух перекрывающихся открытых рамок считывания (ORF): ORF1a и ORF1b. ORF кодируют 16 неструктурных белков. Оставшаяся 1/3 последовательности РНК кодирует четыре классических структурных белка вируса, а именно белок шипа (S), белок оболочки (E), белок мембраны (M) и белок нуклеокапсида (N). Кроме того, гены, кодирующие некоторые вспомогательные вирусные белки, вкраплены в кодирующие области вирусных структурных белков.Кодирующие сайты и количество этих генов дополнительных белков являются важной основой для классификации CoV. CoV могут заражать различные виды хозяев, включая птиц, людей и некоторых других позвоночных. Эти вирусы в основном вызывают респираторные и кишечные инфекции и вызывают разнообразные клинические проявления.6 ^, 7

Коронавирусы уже давно признаны важными патогенами, поражающими дыхательные пути домашних и домашних животных и вызывающими легкие и тяжелые респираторные заболевания у людей.7 ^, 8 На сегодняшний день идентифицировано семь HCoV, которые могут проникать в человека, включая HCoV-229E α-типа и HCoV-NL63; HCoV-HKU1 β-типа, SARS-CoV, MERS-CoV и HCoV-OC43; и 2019-nCoV, вызвавший нынешнюю эпидемию. В зависимости от патогенности HCoV подразделяют на слабопатогенные (включая HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV-NL63 и HCoV-HKU) и высокопатогенные CoV (включая тяжелый острый респираторный синдром CoV (SARS-CoV)9, средний Коронавирус восточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) 10 ^, 11 и SARS-CoV-2). Слабопатогенные HCoV инфицируют верхние дыхательные пути и вызывают у здоровых людей сезонные простудные респираторные заболевания легкой и средней степени тяжести. Напротив, высокопатогенные HCoV (далее именуемые патогенными HCoV или HCoV) поражают нижние дыхательные пути и вызывают тяжелую пневмонию, иногда приводящую к летальному острому повреждению легких (ALI) и ОРДС. Патогенные HCoV имеют высокую заболеваемость и смертность и представляют серьезную угрозу для здоровья населения.12, 13, 14

Механизм цитокинового шторма при патогенной инфекции HCoV

Долгое время считалось, что цитокины играют важную роль в иммунопатологии при вирусной инфекции.Быстрый и хорошо скоординированный врожденный иммунный ответ является первой линией защиты от вирусной инфекции. Однако нерегулируемые и чрезмерные иммунные реакции могут вызывать иммунные повреждения организма человека.15, 16, 17 Соответствующие данные, полученные от тяжелобольных пациентов с HCoV, позволяют предположить, что провоспалительные реакции играют роль в патогенезе HCoV. Эксперименты с клетками in vitro показывают, что замедленное высвобождение цитокинов и хемокинов происходит в клетках респираторного эпителия, дендритных клетках (ДК) и макрофагах на ранней стадии инфекции SARS-CoV.Позже клетки секретируют низкие уровни противовирусных факторов интерферонов (IFN) и высокие уровни провоспалительных цитокинов (интерлейкин (IL)-1β, IL-6 и фактор некроза опухоли (TNF)) и хемокины (лиганд хемокинов с мотивом CC (CCL). )-2, CCL-3 и CCL-5).18, 19, 20 Подобно SARS, MERS-CoV поражает эпителиальные клетки дыхательных путей человека, клетки THP-1 (моноцитарная клеточная линия), макрофаги, происходящие из моноцитов периферической крови человека, и ДК и индуцирует отсроченные, но повышенные уровни провоспалительных цитокинов и хемокинов.21 ^, 22 После инфицирования БВРС-КоВ индуцируются плазмоцитоидные дендритные клетки, но не мононуклеарные макрофаги и ДК,23 продуцирующие большое количество интерферонов.

Уровни сывороточных цитокинов и хемокинов значительно выше у пациентов с тяжелым MERS, чем у пациентов с MERS легкой и средней степени тяжести. 24 ^, 25 Повышенные уровни цитокинов и хемокинов в сыворотке крови у пациентов с MERS связаны с высоким количеством нейтрофилов и моноцитов в тканях легких и периферической крови пациентов, что позволяет предположить, что эти клетки могут играть роль в патологии легких.24, 25, 26 Аналогичные явления наблюдались у пациентов с инфекцией SARS-CoV. защитный ответ против вирусных инфекций, а IFN-I является ключевой молекулой, которая играет противовирусную роль на ранних стадиях вирусной инфекции.35 ^, 36 Замедленное высвобождение интерферонов на ранних стадиях инфекции SARS-CoV и MERS-CoV препятствует противовирусному ответу организма. инфильтрация воспалительных клеток в легочную ткань и, таким образом, повреждение легких.Из этих исследований следует, что нарушение регуляции и/или чрезмерная реакция цитокинов и хемокинов клетками, инфицированными SARS-CoV или MERS-CoV, могут играть важную роль в патогенезе SARS или MERS.

Модели на животных могут хорошо прояснить роль цитокинов и хемокинов в опосредовании легочной иммунопатологии после инфекции HCoV. Несмотря на схожие титры вируса в дыхательных путях, у старых нечеловеческих приматов, инфицированных SARS-CoV, чаще развивается иммунная дисрегуляция, чем у инфицированных молодых приматов, что приводит к более тяжелым проявлениям заболевания.37 Кажется, что чрезмерная воспалительная реакция, а не титр вируса, более важна для смерти старых нечеловеческих приматов. 37 Точно так же у мышей BALB/c, инфицированных SARS-CoV, тяжесть заболевания у старых мышей связана с ранним и непропорционально сильное усиление сигналов генов воспаления, связанных с ОРДС.38 Быстрая репликация SARS-CoV у мышей BALB/c вызывает отсроченное высвобождение IFN-α/β, что сопровождается притоком многих патогенных воспалительных мононуклеарных макрофагов.15 Накопившиеся мононуклеарные макрофаги получают активирующие сигналы через рецепторы IFN-α/β на своей поверхности и продуцируют больше хемоаттрактантов моноцитов (таких как CCL2, CCL7 и CCL12), что приводит к дальнейшему накоплению мононуклеарных макрофагов. Эти мононуклеарные макрофаги продуцируют повышенные уровни провоспалительных цитокинов (TNF, IL-6, IL1-β и индуцибельной синтазы оксида азота), тем самым увеличивая тяжесть заболевания. Истощение воспалительных моноцитов-макрофагов или нейтрализация воспалительного цитокина TNF защищали мышей от смертельной инфекции SARS-CoV.Кроме того, IFN-α/β или мононуклеарные провоспалительные цитокины макрофагов индуцируют апоптоз Т-клеток, что еще больше затрудняет клиренс вируса. и эндотелиальные клетки. IFN-αβ и IFN-γ индуцируют инфильтрацию воспалительных клеток посредством механизмов, включающих лиганд Fas-Fas (FasL) или TRAIL-рецептор смерти 5 (DR5), и вызывают апоптоз клеток эпителия дыхательных путей и альвеол.39, 40, 41 Апоптоз эндотелиальных клеток и эпителиальных клеток повреждает легочные микрососудистые и альвеолярные эпителиальные клеточные барьеры и вызывает просачивание сосудов и альвеолярный отек, что в конечном итоге приводит к гипоксии в организме. Таким образом, медиаторы воспаления играют ключевую роль в патогенезе ОРДС.

ОРДС является основной причиной смерти пациентов, инфицированных SARS-CoV или MERS-CoV.42 ^, 43 В настоящее время известно, что некоторые провоспалительные цитокины (IL-6, IL-8, IL-1β, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и активные формы кислорода) и хемокины (такие как CCL2, CCL-5, IFNγ -индуцированный белок 10 (IP-10) и CCL3) способствуют возникновению ОРДС. 44, 45, 46 Эти результаты подтверждают точку зрения, что после заражения SARS-CoV высокие титры вируса и нарушение регуляции цитокинового/хемокинового ответа вызывают воспалительный цитокиновый шторм. Воспалительный цитокиновый шторм сопровождается иммунопатологическими изменениями в легких.

Взаимосвязь между уровнями цитокинов и прогрессированием заболевания у пациентов

У пациентов с COVID-19 обнаружен высокий уровень экспрессии IL-1B, IFN-γ, IP-10 и моноцитарного хемоаттрактантного белка 1 (MCP-1). .Эти воспалительные цитокины могут активировать клеточный ответ Т-хелперов 1-го типа (Th2). Активация Th2 является ключевым событием в активации специфического иммунитета. секретируемые цитокины (такие как ИЛ-4 и ИЛ-10), подавляющие воспалительную реакцию. Уровни IL-2R и IL-6 в сыворотке у пациентов с COVID-19 положительно коррелируют с тяжестью заболевания (т.е. пациенты в критическом состоянии > тяжелобольные пациенты > обычные пациенты).49 Другие исследования показали, что по сравнению с пациентами с COVID-19 из общих отделений у пациентов в отделении интенсивной терапии (ОИТ) наблюдается повышенный уровень гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, IP-10, MCP-1, макрофагального воспалительного белка-1A в сыворотке крови. и TNF-α. Приведенные выше исследования показывают, что цитокиновый шторм положительно коррелирует с тяжестью заболевания.47

Отчет о тяжелой коронавирусной пневмонии нового типа показал, что 37 пациентам (71,2%) потребовалась искусственная вентиляция легких, а 35 пациентам (67.3%) страдали ОРДС. Более того, смертность пожилых пациентов с ОРДС была значительно выше.50 Основным патологическим изменением при ОРДС является повреждение легочной и интерстициальной ткани, вызванное неспецифической воспалительной клеточной инфильтрацией.51 Локальный избыточный выброс цитокинов является решающим фактором, вызывающим это патологическое изменение. и клинические проявления.52 При COVID-19 воспалительный цитокиновый шторм тесно связан с развитием и прогрессированием ОРДС. Сывороточные уровни цитокинов значительно повышены у пациентов с ОРДС, и степень повышения положительно коррелирует со смертностью.53 Цитокиновый шторм также является ключевым фактором, определяющим клиническое течение внелегочной полиорганной недостаточности. 54 Это частично объясняет признаки внелегочной органной недостаточности (такие как повышение активности печеночных ферментов и креатинина), наблюдаемые у некоторых пациентов с COVID-19 без дыхательной недостаточности. , предполагая, что воспалительный цитокиновый шторм является причиной повреждения внелегочных тканей и органов.

Таким образом, коронавирусная инфекция нового типа вызывает у пациентов воспалительный цитокиновый шторм.Цитокиновый шторм приводит к ОРДС или внелегочной полиорганной недостаточности и является важным фактором, вызывающим обострение COVID-19 или даже смерть.

Теоретическая стратегия лечения при воспалительном цитокиновом шторме

Высокий титр вируса и последующий сильный воспалительный цитокиновый и хемокиновый ответ связаны с высокой заболеваемостью и смертностью, наблюдаемыми при патогенной инфекции HCoV. Опыт лечения SARS и MERS показывает, что снижение вирусной нагрузки путем вмешательства на ранних стадиях заболевания и контроль воспалительных реакций с помощью иммуномодуляторов являются эффективными мерами для улучшения прогноза инфекции HCoV. 55, 56, 57, 58

IFN-λ

IFN-λ в первую очередь активирует эпителиальные клетки и снижает опосредованную мононуклеарными макрофагами провоспалительную активность IFN-αβ.59 Кроме того, IFN-λ ингибирует рекрутирование нейтрофилов в очаги воспаления.60 SARS-CoV и MERS-CoV в основном поражают альвеолярные эпителиальные клетки (AEC). IFN-λ активирует противовирусные гены в эпителиальных клетках, тем самым оказывая противовирусное действие без чрезмерной стимуляции иммунной системы человека. Таким образом, IFN-λ может быть идеальным лечением.В некоторых исследованиях пегилированные и непегилированные интерфероны применялись для лечения HCoV, но эффективность значительно различалась из-за применения разных схем лечения. Раннее введение интерферонов имеет определенные преимущества в снижении вирусной нагрузки и в определенной степени улучшает клинические симптомы пациентов. Однако он не снижает уровень смертности.61, 62, 63 За исключением раннего введения, применение интерферонов в другие периоды времени не принесет больше пользы, чем лечение плацебо. 63

Терапия кортикостероидами

Кортикостероиды представляют собой класс стероидных гормонов, обладающих противовоспалительными свойствами. Кортикостероиды обычно используются для подавления воспаления. Во время эпидемии атипичной пневмонии 2003 года кортикостероиды были основным средством иммуномодуляции. Своевременное введение кортикостероидов часто приводит к ранним улучшениям, таким как снижение лихорадки, облегчение лучевой инфильтрации легких и улучшение оксигенации. значительно снизить смертность и сократить сроки пребывания в стационаре.Кроме того, у этих пациентов, получавших лечение глюкокортикоидами, редко возникали вторичные инфекции и другие осложнения.67 Однако есть исследования, показывающие, что введение терапии кортикостероидами во время инфицирования человека SARS-CoV приводило к неблагоприятным последствиям. Раннее лечение пациентов с ОРВИ кортикостероидами увеличивало вирусную нагрузку в плазме у пациентов, не находящихся в отделении интенсивной терапии, что приводило к обострению заболевания. 64

При лечении пациентов с COVID-19 использование глюкокортикоидов снова стало серьезной проблемой для клиницистов.68 Время введения и дозировка глюкокортикоидов очень важны для исхода тяжелобольных пациентов. Слишком раннее введение глюкокортикоидов угнетает инициацию механизма иммунной защиты организма, тем самым увеличивая вирусную нагрузку и в конечном итоге приводя к неблагоприятным последствиям. Поэтому глюкокортикоиды в основном используются у пациентов в критическом состоянии, страдающих воспалительным цитокиновым штормом. Торможение чрезмерного воспаления за счет своевременного введения глюкокортикоидов на ранней стадии воспалительного цитокинового шторма эффективно предотвращает возникновение ОРДС и защищает функции органов больных.Для пациентов с прогрессирующим ухудшением показателей оксигенации, быстрым прогрессом визуализации и чрезмерной воспалительной реакцией целесообразно применение глюкокортикоидов в краткосрочной перспективе (3–5 дней), а рекомендуемая доза не превышает эквивалента метилпреднизолона 1–2 мг. /кг/день.69 Следует отметить, что большие дозы глюкокортикоидов могут задерживать элиминацию коронавируса из-за иммуносупрессии.

Внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ)

Chen et al. проанализировали лечение 99 пациентов из Уханя с COVID-19 и обнаружили, что 27% этих пациентов получали лечение ВВИГ.70 Терапия ВВИГ имеет двойной эффект иммунозамещения и иммуномодуляции. Ценность его практического применения при лечении COVID-19 нуждается в подтверждении в будущих исследованиях.

Антагонисты семейства IL-1

Во время цитокинового шторма тремя наиболее важными цитокинами в семействе IL-1 являются IL-1β, IL-18 и IL-33.4 Исследования, посвященные ингибированию IL-1β для снижения Цитокиновый шторм привлек наибольшее внимание. Анакинра, антагонист IL-1β, может использоваться для лечения цитокинового шторма, вызванного инфекцией.Это значительно улучшило 28-дневную выживаемость пациентов с тяжелым сепсисом.71 В настоящее время нет клинического опыта применения специфических блокаторов семейства ИЛ-1 для лечения COVID-19. Их эффекты должны быть проверены с помощью экспериментов на животных in vivo и клинических испытаний.

Антагонисты ИЛ-6

Тоцилизумаб — антагонист ИЛ-6, подавляющий функцию иммунной системы. В настоящее время тоцилизумаб в основном применяется при аутоиммунных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит.72 Тоцилизумаб сам по себе оказывает терапевтическое действие на вызванный инфекцией цитокиновый шторм. 73 Уровень IL-6 в сыворотке значительно повышен у тяжелобольных пациентов с COVID-19. Клинические исследования, проведенные в Китае, показали, что тоцилизумаб эффективен при лечении тяжелобольных пациентов с обширными двусторонними поражениями легких, у которых повышен уровень ИЛ-6. Первая доза составляла 4–8 мг/кг. Рекомендуемая доза составляла 400 мг с 0,9% солевым раствором, разбавленным до 100 мл. Время инфузии более 1 часа. Для пациентов с плохой эффективностью первой дозы можно применить дополнительную дозу через 12 ч (доза та же, что и раньше), максимум две кумулятивных дозы.

Блокаторы ФНО

ФНО являются ключевыми воспалительными факторами, запускающими цитокиновый шторм. Они являются привлекательными мишенями для контроля цитокинового шторма. Мета-анализ показал, что терапия анти-ФНО значительно улучшила выживаемость у пациентов с сепсисом.74 Терапия анти-ФНО также дала удовлетворительные результаты при лечении неинфекционных заболеваний, таких как атеросклероз.75 Исследования на животных моделях показали, что ФНО вносят значительный вклад в острое повреждение легких и нарушают реакцию Т-клеток у мышей, инфицированных SARS-CoV.У мышей нейтрализация активности TNF или потеря рецептора TNF обеспечивает защиту от заболеваемости и смертности, вызванных SARS-CoV.15 ^, 76 Однако следует отметить, что, по крайней мере, на поздних стадиях инфекции ФНО не выявлялся в сыворотке больных ОРВИ. В настоящее время блокаторы ФНО не предлагались для лечения пациентов с COVID-19, но эффективность блокаторов ФНО при лечении пациентов с COVID-19 заслуживает дальнейшего изучения.

Ингибиторы IFN-αβ

IFN-αβ ограничивает репликацию вируса, индуцируя IFN-стимулируемый ген.Однако IFN-αβ также усугубляет заболевания за счет усиления рекрутирования и функции мононуклеарных макрофагов и других клеток врожденного иммунитета. Хотя ранний ответ интерферона оказывает защитное действие на мышей, инфицированных SARS-CoV, отсроченная передача сигналов IFN-αβ вызывает дисбаланс иммунных ответов против SARS-CoV у людей. Это явление указывает на то, что выбор времени для лечения ИФН имеет решающее значение для исхода заболевания. Основываясь на этих результатах, блокаторы или антагонисты рецепторов IFN-αβ следует назначать на поздних стадиях тяжелого заболевания для предотвращения чрезмерных воспалительных реакций.16

Хлорохин

Хлорохин ингибирует выработку и высвобождение TNF и IL-6, что указывает на то, что хлорохин может подавлять цитокиновый шторм у пациентов, инфицированных COVID-19.77 Хлорохина фосфат использовался для лечения взрослых в возрасте от 18 до 65 лет в Китае . 78 Рекомендуемая дозировка при диагностике и лечении новой коронавирусной пневмонии (испытательная версия 7) из Китая следующая: при весе более 50 кг по 500 мг каждый раз, 2 раза в день, курс лечения 7 дней; При массе менее 50 кг — по 500 мг каждый раз в первый и второй день 2 раза в день, по 500 мг каждый раз в третий-седьмой день 1 раз в день.

Улинастатин

Улинастатин является естественным противовоспалительным веществом в организме. Он защищает эндотелий сосудов, ингибируя выработку и высвобождение медиаторов воспаления. Улинастатин широко используется в клинической практике для лечения панкреатита и острой недостаточности кровообращения. Улинастатин снижает уровни провоспалительных факторов, таких как TNF-α, IL-6 и IFN-γ, и повышает уровень противовоспалительного фактора IL-10.79 Эти действия улинастатина способствуют балансу между провоспалительными и противовоспалительными реакциями у людей. , тем самым прерывая цитокиновый шторм, вызванный порочным кругом воспаления. Исследования на животных показывают, что противовоспалительный эффект высоких доз улинастатина эквивалентен действию гормонов.80 Однако, в отличие от глюкокортикоидов, улинастатин не подавляет иммунные функции и вряд ли вызывает такие последствия, как некроз головки бедренной кости. Таким образом, у улинастатина большие перспективы применения в лечении COVID-19.

Ингибирующий эффект окисленных фосфолипидов (OxPL)

В мышиной модели инфекции вируса гриппа А (IAV) OxPL увеличивает продукцию цитокинов/хемокинов в макрофагах легких через Toll-подобный рецептор 4 (TLR4)–TIR- домен-содержащий адаптер, индуцирующий сигнальный путь интерферона-β, тем самым способствуя возникновению ОПЛ.81 Эриторан является антагонистом TLR4. Он не обладает прямой противовирусной активностью, но обладает сильными иммуномодулирующими функциями. Эриторан эффективно снижает выработку OxPL, воспалительных цитокинов и хемокинов у мышей, инфицированных IAV, тем самым снижая смертность.82 Патогенные коронавирусы человека также вызывают высокое накопление OxPL в тканях легких пациентов, что приводит к ОПЛ. 81 Таким образом, кажется, что eritoran и другие ингибиторы OxPL также могут ослаблять воспалительные реакции, вызванные HCoV.

Терапия агонистом сфингозин-1-фосфатного рецептора 1

Сфингозин-1-фосфат (S1P) представляет собой сигнальный лизофосфолипид, который способствует синтезу и секреции цитокинов.83 Сигнальные пути рецептора S1P значительно ингибируют патологические повреждения, вызванные врожденным и адаптивным иммунным ответом хозяина, тем самым уменьшая цитокиновый шторм, вызванный вирусной инфекцией гриппа.84 ^, 85 В мышиных моделях инфекции IAV передача сигнала сфингозин-1-фосфатным рецептором 1 (S1P ₁ ) в респираторных эндотелиальных клетках модулирует патогенные воспалительные реакции.85 Агонисты, нацеленные на S1P ₁, ингибируют провоспалительные цитокины и хемокины, а также снижают заболеваемость и смертность от ИАВ.85 ^, 86 SARS-CoV-2 также в основном поражает эпителиальные клетки легких и эндотелиальные клетки человека. Следовательно, агонисты S1P ₁ могут быть потенциальными терапевтическими препаратами для снижения реакции цитокинов и хемокинов у тех пациентов с HCoV, клетки которых генерировали чрезмерные иммунные ответы. Препарат, модулирующий S1P-рецептор, сипонимод, был одобрен в 2019 году для лечения рассеянного склероза. Тем не менее, необходимы клинические испытания, чтобы дополнительно проверить, является ли сипонимод идеальной альтернативой для лечения цитокинового шторма.

Терапия стволовыми клетками

Являясь важным членом семейства стволовых клеток, мезенхимальные стволовые клетки (МСК) не только обладают потенциалом самообновления и разнонаправленной дифференцировки, но также обладают сильными противовоспалительными и иммунорегуляторными функциями. МСК могут ингибировать аномальную активацию Т-лимфоцитов и макрофагов и индуцировать их дифференцировку в субпопуляции регуляторных Т-клеток (Treg) и противовоспалительных макрофагов соответственно. Он также может ингибировать секрецию провоспалительных цитокинов, таких как IL-1, TNF-α, IL-6, IL-12 и IFN-γ, уменьшая тем самым возникновение цитокиновых бурь. 87 ^, 88 В то же время МСК могут секретировать IL-10, фактор роста гепатоцитов, фактор роста кератиноцитов и VEGF для облегчения ОРДС, регенерации и восстановления поврежденных тканей легких и противодействия фиброзу.89 Таким образом, ожидается, что многие функции МСК будут сделать его эффективным методом лечения COVID-19.

Процедуры очистки крови

Кроме того, процедуры очистки крови, используемые в настоящее время в клинической практике, могут в определенной степени устранить воспалительные факторы.Система очистки крови, включающая плазмаферез, адсорбцию, перфузию, фильтрацию крови/плазмы и т. д., позволяет удалять воспалительные факторы, блокировать «цитокиновый шторм», уменьшать ущерб от воспалительной реакции организма. Эта терапия может быть использована для тяжелых и критических больных на ранних и средних стадиях заболевания. Технология искусственной печени под руководством академика Ли Ланьцзюаня может устранить воспалительные факторы в больших масштабах. Эта технология также использовалась для противодействия цитокиновому шторму H7N9, и ее применение в отношении COVID-19 также достигло определенной эффективности.90 Ранняя заместительная почечная терапия, аналогичная принципу лечения искусственной печени, по-видимому, является эффективным методом контроля цитокинового шторма.91

Ингибиторы рекрутирования и функции мононуклеарных макрофагов

Отчет о вскрытии пациентов с COVID-19 выявил большое количество воспалительной клеточной инфильтрации в легких умершего. участок воспаления за счет опосредованного малой интерферирующей РНК (миРНК) молчания CC хемокинового рецептора типа 2 (CCR2), что, как было продемонстрировано экспериментами на животных, улучшает исход заболевания.93 ^, 94 Агонисты Toll-подобного рецептора 7 (TLR7) стимулируют мононуклеарные макрофаги, вызывая сильную воспалительную реакцию во время заражения вирусами с одноцепочечной РНК (ssRNA), такими как HCoV. Следовательно, антагонисты TLR7 могут смягчить шторм воспалительных факторов, вызванных инфекцией SARS-CoV-2.

Укрепляет сосудистый барьер

Повышение проницаемости сосудов также является характерным изменением, происходящим в процессе цитокинового шторма. На животных моделях заражения сепсисом и вирусом H5N1 было обнаружено, что активация эндотелиального пути Slit-Robo4 лекарственными препаратами улучшала проницаемость сосудов, тем самым уменьшая возникновение цитокинового шторма во время инфекции.95

Заключение

Воспаление является неотъемлемой частью эффективного иммунного ответа. Трудно успешно устранить инфекции без воспаления. Воспалительная реакция начинается с первоначального распознавания патогенов. Затем патогены опосредуют рекрутирование иммунных клеток, что устраняет патогены и в конечном итоге приводит к репарации тканей и восстановлению гомеостаза. Однако SARS-CoV-2 вызывает у некоторых инфицированных людей чрезмерный и продолжительный цитокиновый/хемокиновый ответ, известный как цитокиновый шторм.Цитокиновый шторм вызывает ОРДС или полиорганную дисфункцию, что приводит к физиологическому ухудшению состояния и смерти. Своевременный контроль цитокинового шторма на его ранней стадии с помощью таких средств, как иммуномодуляторы и антагонисты цитокинов, а также уменьшение воспалительно-клеточной инфильтрации легких является залогом повышения успешности лечения и снижения смертности пациентов с COVID-19. .

Механизм цитокинового шторма при COVID-19 и потенциальная терапия.

① Добавка с IFN-λ для активации врожденного иммунитета; ② Использование иммуномодулятора для восстановления иммунного баланса; ③ Ингибирование продукции цитокинов; ④ Удаление цитокинов; ⑤ Ингибирование рекрутирования и функции мононуклеарных макрофагов; ⑥ Укрепление сосудистого барьера путем активации эндотелиального сигнального пути Slit-Robo4.

Декларация о конкурирующих интересах

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Авторы

QY руководили написанием рукописи. JHM разработал первоначальную концепцию и структуру рукописи и руководил составлением рукописи. Все авторы внесли свой вклад в содержание, составление и критический обзор рукописи.

Финансирование

Это исследование было поддержано специальным научно-исследовательским фондом Чжэцзянского университета по профилактике и борьбе с COVID-19.

Ссылки

1. Lai C.-C., Shih T.-P., Ko W.-C., Tang H.-J., Hsueh P.-R. Тяжелый острый респираторный синдром коронавирус 2 (SARS-CoV-2) и коронавирусная болезнь-2019 (COVID-19): эпидемия и вызовы. Противомикробные агенты Int J. 2020 17.02.2020/ [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]2. Специальная экспертная группа по борьбе с эпидемией новой коронавирусной пневмонии Китайской ассоциации профилактической медицины Обновленная информация об эпидемиологических характеристиках новой коронавирусной пневмонии (COVID-19) Chin J Epidemiol.2020:41. [PubMed] [Google Scholar]3. Чустерман Б.Г., Свирски Ф.К., Вебер Г.Ф. Цитокиновый шторм и патогенез сепсиса. Семинары Иммунопатол. 2017;39(5):517–528. 01.07.2017. [PubMed] [Google Scholar]4. Шимабукуро-Ворнхаген А., Гёдель П., Субклеве М., Штеммлер Х.Дж., Шлёссер Х.А., Шлаак М. Синдром высвобождения цитокинов. J Иммунотерапия рака. 2018;6(1):56. 15.06.2018. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
5. Wan S., Yi Q., Fan S., Lv J., Zhang X., Guo L., et al. Характеристики субпопуляций лимфоцитов и цитокинов в периферической крови 123 госпитализированных пациентов с новой коронавирусной пневмонией (НКП) 2019 года.2020:medRxiv2020.02.10.20021832.
6. Пек К.М., Берч К.Л., Хайзе М.Т., Барик Р.С. Расширение круга хозяев коронавируса и появление коронавируса ближневосточного респираторного синдрома: биохимические механизмы и эволюционные перспективы. Энн Рев Вирол. 2015;2(1):95–117. PubMed PMID: 26958908. Epub 07.08.2015. англ. [PubMed] [Google Scholar]7. Су С., Вонг Г., Ши В., Лю Дж., Лай А.К.К., Чжоу Дж. Эпидемиология, генетическая рекомбинация и патогенез коронавирусов. Тенденции микробиол. июнь 2016 г .; 24 (6): 490–502.PubMed PMID: 27012512. Epub 26 марта 2016 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]8. Вайс С.Р., Навас-Мартин С. Патогенез коронавируса и возникающий возбудитель тяжелого острого респираторного синдрома коронавирус. Microbiol Mol Biol Rev. Dec 2005;69(4):635–664. PubMed PMID: 16339739. Pubmed Central PMCID: PMC1306801. Эпублик 13.12.2005. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Перлман С., Нетланд Дж. Коронавирусы после атипичной пневмонии: обновленная информация о репликации и патогенезе. Nature Rev Microbiol.2009;7(6):439–450. PubMed PMID: 19430490. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]10. Хьюгель Дж., Мартин Э.Т., Кайперс Дж., Инглунд Дж.А. Коронавирус-ассоциированная пневмония у ранее здоровых детей. Pediatr Infect Disease J. 2007;26(8):753–755. PubMed PMID: 17848893. англ. [PubMed] [Google Scholar] 11. Кайперс Дж., Мартин Э.Т., Хьюгель Дж., Райт Н., Морроу Р., Инглунд Дж.А. Клиническое течение заболевания у детей, связанное с вновь описанными подтипами коронавируса. Педиатрия. 2007;119(1):e70–ee6. PubMed PMID: 17130280.Эпублик 27 ноября 2006 г. англ. [PubMed] [Google Scholar] 12. Kuiken T., Fouchier R.A.M., Schutten M., Rimmelzwaan G.F., van Amerongen G., van Riel D. Недавно обнаруженный коронавирус как основная причина тяжелого острого респираторного синдрома. Ланцет. 2003;362(9380):263–270. (Лондон, Англия) PubMed PMID: 12892955. eng. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]13. Peiris JSM, Lai ST, Poon LLM, Guan Y., Yam LYC, Lim W. Коронавирус как возможная причина тяжелого острого респираторного синдрома. Ланцет. 2003;361(9366):1319–1325.(Лондон, Англия) PubMed PMID: 12711465. eng. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]14. Заки А.М., ван Бохемен С., Бестеброер Т.М., Остерхаус А.Д.М.Е., Фушье Р.А.М. Выделение нового коронавируса от мужчины с пневмонией в Саудовской Аравии. англ J Med. 2012;367(19):1814–1820. PubMed PMID: 23075143. Epub 17.10.2012. англ. [PubMed] [Google Scholar] 15. Чаннаппанавар Р., Фер А.Р., Виджай Р., Мак М., Чжао Дж. , Мейерхольц Д.К. Дисрегуляция интерферона типа I и воспалительные реакции моноцитов-макрофагов вызывают летальную пневмонию у мышей, инфицированных SARS-CoV.Клеточный микроб-хозяин. 2016;19(2):181–193. PubMed PMID: 26867177. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]16. Дэвидсон С., Майни М.К., Вак А. Болезнетворные эффекты интерферонов типа I при вирусных, бактериальных и коинфекциях. J Interf Cytokine Res Offic J Int Soc Interf Cytokine Res. 2015;35(4):252–264. PubMed PMID: 25714109. Epub 25 февраля 2015 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]17. Шоу А.С., Гольдштейн Д.Р., Монтгомери Р.Р. Возрастная дисрегуляция врожденного иммунитета. Натур Рев Иммунол.2013;13(12):875–887. PubMed PMID: 24157572. Epub 25.10.2013. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]18. Law HKW, Cheung CY, Ng HY, Sia SF, Chan YO, Luk W. Повышающая регуляция хемокинов в дендритных клетках человека, полученных из моноцитов, инфицированных SARS-коронавирусом. Кровь. 2005;106(7):2366–2374. PubMed PMID: 15860669. Epub 28 апреля 2005 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]19. Cheung C.Y., Poon L.L.M., Ng I.H.Y., Luk W., Sia S.-F., Wu M.H.S. Цитокиновые ответы в макрофагах, инфицированных коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома in vitro: возможная связь с патогенезом.Дж Вирол. 2005;79(12):7819–7826. PubMed PMID: 15919935. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]20. Лау С.К.П., Лау C.C.Y., Чан К.-Х., Ли С.П.И., Чен Х., Джин Д.-Ю. Отсроченная индукция провоспалительных цитокинов и подавление врожденного противовирусного ответа новым коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома: последствия для патогенеза и лечения. Джей Ген Вирол. 2013; 94 (часть 12): 2679–2690. PubMed PMID: 24077366. Epub 28 сентября 2013 г. англ. [PubMed] [Google Scholar] 21. Тайнелл Дж., Вестениус В., Rönkkö E., Munster VJ, Melén K., Österlund P. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома демонстрирует плохую репликацию, но значительную индукцию противовирусных ответов в макрофагах и дендритных клетках, полученных из моноцитов человека. Джей Ген Вирол. 2016;97(2):344–355. PubMed PMID: 26602089. Epub 24 ноября 2015 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]22. Чжоу Дж., Чу Х., Ли С., Вонг Б.Х.-Ю., Ченг З.-С., Пун В.К.-М. Активная репликация коронавируса ближневосточного респираторного синдрома и аберрантная индукция воспалительных цитокинов и хемокинов в макрофагах человека: значение для патогенеза.J Инфекционные заболевания. 2014;209(9):1331–1342. PubMed PMID: 24065148. Epub 24 сентября 2013 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Шойплейн В.А., Зайфрид Дж., Мальчик А.Х., Миллер Л., Хёкер Л., Вергара-Алерт Дж. Высокая секреция интерферонов плазмоцитоидными дендритными клетками человека при распознавании коронавируса ближневосточного респираторного синдрома. Дж Вирол. 2015;89(7):3859–3869. PubMed PMID: 25609809. Epub 21 января 2015 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]24. Ким Э.С., Чхве П.Г., Пак В.Б., О Х.С., Ким Э.Дж., Нам Э.Ю. Клиническое течение и цитокиновый профиль коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома. J Korean Med Sci. 2016;31(11):1717–1725. PubMed PMID: 27709848. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]25. Мин С.-К., Чеон С., Ха Н.-Ю., Сон К.М., Ким Ю., Айгерим А. Сравнительный и кинетический анализ выделения вируса и иммунологических ответов у пациентов с MERS, представляющих широкий спектр тяжести заболевания. Научный доклад 2016; 6: 25359. PubMed PMID: 27146253.англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]26. Нг Д.Л., Аль Хосани Ф., Китинг М.К., Гербер С.И., Джонс Т.Л., Меткалф М.Г. Клинико-патологические, иммуногистохимические и ультраструктурные данные смертельного случая коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома в Объединенных Арабских Эмиратах, апрель 2014 г. Am J Pathol. 2016;186(3):652–658. PubMed PMID: 26857507. Epub 05.02.2016. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]27. JY C., PR H., WC C., CJ Y., PC Y. Временные изменения профилей цитокинов/хемокинов и поражение легких при тяжелом остром респираторном синдроме. Respirol (Карлтон, Вик) 2006;11(6):715–722. PubMed PMID: 17052299. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]28. CH W., CY L., YL W., CL C., KH H., HC L. Сохранение воспаления легких и цитокинов легких с аномалиями КТ высокого разрешения во время выздоровления от атипичной пневмонии. Респиратор Рез. 2005; 6:42. PubMed PMID: 15888207. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]29. CK W., CW L., AK W., WK I., NL L., IH C. Плазменные воспалительные цитокины и хемокины при тяжелом остром респираторном синдроме. Клин Экспер Иммунол.2004;136(1):95–103. PubMed PMID: 15030519. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]30. Y Z., J L., Y Z., L W., X Y., W Z. Анализ цитокинов сыворотки крови у больных с тяжелым острым респираторным синдромом. Заразить иммун. 2004;72(8):4410–4415. PubMed PMID: 15271897. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]31. Цзянь Дж.-Ю., Сюэ П.-Р., Ченг В.-К., Юй К.-Дж., Ян П.-К. Временные изменения профилей цитокинов/хемокинов и поражение легких при тяжелом остром респираторном синдроме. Respirol (Карлтон, Вик) 2006;11(6):715–722.PubMed PMID: 17052299. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]32. Ван С.-Х., Лю С.-Ю., Ван Ю.-Л., Чжоу С.-Л., Хуан К.-Х., Линь Х.-С. Сохранение воспаления легких и легочных цитокинов с аномалиями КТ высокого разрешения во время выздоровления от атипичной пневмонии. Респиратор Рез. 2005;6(1):42. -. PubMed PMID: 15888207. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]33. Вонг К.К., Лам К.В.К., Ву А.К.Л., Ип В.К., Ли Н.Л.С., Чан И.Х.С. Плазменные воспалительные цитокины и хемокины при тяжелом остром респираторном синдроме.Клинический Экспер Иммунол. 2004;136(1):95–103. PubMed PMID: 15030519. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]34. Zhang Y., Li J., Zhan Y., Wu L., Yu X., Zhang W. Анализ сывороточных цитокинов у пациентов с тяжелым острым респираторным синдромом. Заразить иммун. 2004;72(8):4410–4415. PubMed PMID: 15271897. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]35. A G.-S., CA B. Интерфероны типа 1 и отношения вирус-хозяин: урок разрядки. Наука. 2006;312(5775):879–882. (Нью-Йорк, штат Нью-Йорк) PubMed PMID: 166
.[PubMed] [Google Scholar] 36. R C., AR F., J Z., C W.-L., JE A., M M. Время ответа IFN-I по отношению к репликации вируса определяет исходы коронавирусной инфекции MERS. Джей Клин Инвест. 2019;130:3625–3639. PubMed PMID: 31355779. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]37. Смитс С.Л., де Ланг А., ван ден Бранд Дж.М.А., Лейтен Л.М., ван Айкен В.Ф., Эйкеманс М.Дж.К. Обострение врожденного ответа хозяина на SARS-CoV у пожилых приматов, не являющихся человеком. Возбудители PLoS. 2010;6(2) e1000756-e. PubMed PMID: 20140198.англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]38. Роккс Б., Баас Т., Зорнетцер Г.А., Хаагманс Б., Шихан Т., Фриман М. Ранняя активация цитокинов, связанных с острым респираторным дистресс-синдромом, способствует летальному исходу в модели стареющей мыши с тяжелой коронавирусной инфекцией острого респираторного синдрома. Дж Вирол. 2009;83(14):7062–7074. PubMed PMID: 19420084. Epub 06/05/2009. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]39. Херольд С., Штайнмюллер М., фон Вульфен В., Чакарова Л., Пинто Р., Плешка С. Апоптоз эпителия легких при пневмонии, вызванной вирусом гриппа: роль лиганда, индуцирующего апоптоз, связанного с TNF, экспрессируемого макрофагами. J Экспер Мед. 2008;205(13):3065–3077. PubMed PMID: 1
96. Epub 08.12.2008. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]40. Хёгнер К., Вольф Т., Плешка С., Плог С., Грубер А.Д., Калинке У. Экспрессируемый макрофагами IFN-β способствует апоптотическому повреждению альвеолярных эпителиальных клеток при тяжелой пневмонии, вызванной вирусом гриппа. Возбудители PLoS. 2013;9(2) e1003188-e. PubMed PMID: 23468627.Эпб 2013/02/28. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]41. Родриг-Жерве И.Г., Лаббе К., Дагенайс М., Дюполь-Шикоин Дж., Шампань С., Моризо А. Клеточный ингибитор белка апоптоза cIAP2 защищает от некроза легочной ткани во время инфекции вируса гриппа, способствуя выживанию хозяина. Клеточный микроб-хозяин. 2014;15(1):23–35. PubMed PMID: 24439895. англ. [PubMed] [Google Scholar]42. Дростен К., Сейлмайер М., Корман В.М., Хартманн В., Шейбле Г., Сак С. Клинические особенности и вирусологический анализ случая коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома.Ланцет Инфекционные заболевания. 2013;13(9):745–751. PubMed PMID: 23782859. Epub 17 июня 2013 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]43. Лью Т.В.К., Квек Т.-К., Тай Д., Эрнест А., Лу С., Сингх К. Острый респираторный дистресс-синдром у пациентов в критическом состоянии с тяжелым острым респираторным синдромом. ДЖАМА. 2003;290(3):374–380. PubMed PMID: 12865379. англ. [PubMed] [Google Scholar]44. Jiang Y., Xu J., Zhou C., Wu Z., Zhong S., Liu J. Характеристика профилей цитокинов/хемокинов при тяжелом остром респираторном синдроме.Am J Respirat Critical Care Med. 2005;171(8):850–857. PubMed PMID: 15657466. Epub 18 января 2005 г. англ. [PubMed] [Google Scholar]45. Регунатан Р., Джаяпал М. , Хсу Л.-Ю., Чнг Х.-Х., Тай Д., Люн Б.П. Профиль экспрессии генов иммунного ответа у пациентов с тяжелым острым респираторным синдромом. БМС Иммунол. 2005; 6:2. -. PubMed PMID: 15655079. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]46. Кэмерон М.Дж., Бермехо-Мартин Дж.Ф., Данеш А., Мюллер М.П., Кельвин Д.Дж. Иммунопатогенез тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС) человека Virus Res.2008;133(1):13–19. PubMed PMID: 17374415. Epub 19 марта 2007 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]47. Хуан С., Ван Ю., Ли С., Рен Л., Чжао Дж., Ху Ю. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 года в Ухане, Китай. Ланцет. 2020;395(10223):497–506. 15.02.2020/ [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Марчинго Дж.М., Синклер Л.В., Хауден А.Дж.М., Кантрелл Д.А. Количественный анализ того, как Myc контролирует протеомы Т-клеток и метаболические пути во время активации Т-клеток.электронная жизнь. 2020;9:e53725. 05.02.2020. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]49. Чен Л., Лю Х.-Г., Лю В., Лю Дж., Лю К., Шан Дж. Анализ клинических особенностей 29 пациентов с новой коронавирусной пневмонией 2019 года. Chin J Tuberc Respir Dis. 2020;43 [Google Scholar]50. Yang X., Yu Y., Xu J., Shu H., Ja Xia, Liu H. Клиническое течение и исходы тяжелобольных пациентов с пневмонией SARS-CoV-2 в Ухане, Китай: одноцентровое, ретроспективное, обсервационное учиться. Ланцет Респират Мед. 2020 С2213-600(20)30079-5.PubMed PMID: 32105632. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]51. Force* TADT Острый респираторный дистресс-синдром: берлинское определение. ДЖАМА. 2012;307(23):2526–2533. [PubMed] [Google Scholar]52. Дуда Д.Н., Джексон Р., Грасеманн Х., Паланияр Н. Врожденный иммунный сурфактантный белок D одновременно связывает внеклеточные ловушки нейтрофилов и углеводные лиганды и способствует захвату бактерий. J Immunol (Балтимор, Мэриленд: 1950) 2011; 187 (4): 1856–1865. PubMed PMID: 21724991. Epub 01.07.2011.англ. [PubMed] [Google Scholar]53. Парсонс П.Е. , Эйснер М.Д., Томпсон Б.Т., Маттей М.А., Анкукевич М., Бернард Г.Р. Вентиляция нижнего дыхательного объема и цитокиновые маркеры воспаления в плазме у пациентов с острым повреждением легких. Критическая терапия Мед. 2005;33(1):1–232. PubMed PMID: 15644641. англ. [PubMed] [Google Scholar]54. Ван Х., Ма С. Цитокиновый шторм и факторы, определяющие последовательность и тяжесть органной дисфункции при синдроме полиорганной дисфункции. Am J Emerg Med. 2008;26(6):711–715.PubMed PMID: 18606328. англ. [PubMed] [Google Scholar]55. Стокман Л.Дж., Беллами Р., Гарнер П. ТОРС: систематический обзор эффектов лечения. ПЛОС Мед. 2006;3(9) e343-e. PubMed PMID: 16968120. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]56. Араби Ю.М., Шалхуб С., Мандура Ю., Аль-Хамид Ф., Аль-Омари А., Аль Касим Э. Рибавирин и интерфероновая терапия у пациентов в критическом состоянии с ближневосточным респираторным синдромом: многоцентровое обсервационное исследование. Клинические инфекционные заболевания Offic Publ Infect Diseases Soc Am. 2019 ciz544. PubMed PMID: 31925415. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]57. Фальзарано Д., де Вит Э., Расмуссен А.Л., Фельдманн Ф., Окумура А., Скотт Д.П. Лечение интерфероном-α2b и рибавирином улучшает исход у макак-резусов, инфицированных MERS-CoV. Природа Мед. 2013;19(10):1313–1317. PubMed PMID: 24013700. Epub 08.09.2013. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]58. Омрани А.С., Саад М.М., Баиг К., Бахлул А., Абдул-Матин М., Алайдароос А.Ю. Рибавирин и интерферон альфа-2а при тяжелой коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома: ретроспективное когортное исследование.Ланцет Инф Болезни. 2014;14(11):1090–1095. PubMed PMID: 25278221. Epub 29 сентября 2014 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]59. Дэвидсон С., МакКейб Т.М., Кротта С., Гад Х.Х., Хессель Э.М., Бейнке С. IFNλ является мощным противогриппозным терапевтическим средством без воспалительных побочных эффектов лечения IFNα. EMBO Молекул Мед. 2016;8(9):1099–1112. PubMed PMID: 27520969. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]60. Blazek K., Eames H.L., Weiss M., Byrne A.J., Perocheau D., Pease J.E. IFN-λ устраняет воспаление путем подавления нейтрофильной инфильтрации и продукции IL-1β.J Экспер Мед. 2015;212(6):845–853. PubMed PMID: 25941255. Epub 04/05/2015. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]61. Араби Ю.М., Шалхуб С., Мандура Ю., Аль-Хамид Ф., Аль-Омари А., Аль-Касим Э. Рибавирин и интерфероновая терапия для тяжелобольных пациентов с ближневосточным респираторным синдромом: многоцентровое обсервационное исследование. Клинические инфекционные заболевания. 2019 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]62. Омрани А.С., Саад М.М., Баиг К., Бахлул А., Абдул-Матин М., Алайдароос А.Ю. Рибавирин и интерферон альфа-2а при тяжелой коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома: ретроспективное когортное исследование.Ланцет Инфекционные заболевания. 2014;14(11):1090–1095. 01.11.2014/ [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]63. Зумла А., Чан Дж.Ф.В., Ажар Э.И., Хуэй Д.С.С., Юэн К.-Ю. Коронавирусы — открытие лекарств и терапевтические возможности. Nature Rev Drug Discov. 2016;15(5):327–347. 01.05.2016. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]64. Ауён Т.В., Ли Дж.С.В., Лай В.К., Чой Ч.Х., Ли Х.К., Ли Дж.С. Использование кортикостероидов в качестве лечения атипичной пневмонии было связано с неблагоприятными исходами: ретроспективное когортное исследование.J заразить. 2005;51(2):98–102. PubMed PMID: 16038758. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]65. Хо Дж. К., Оои Г. К., Мок Т. Ю., Чан Дж. В., Хунг И., Лам Б. Высокие дозы пульса против непульсовых схем кортикостероидов при тяжелом остром респираторном синдроме. Am J Resp Crit Care Med. 2003;168(12):1449–1456. PubMed PMID: 12947028. Epub 28 августа 2003 г. англ. [PubMed] [Google Scholar]66. Yam LY-C., Lau AC-W., Lai F.Y.-L., Shung E., Chan J., Wong V. Лечение кортикостероидами тяжелого острого респираторного синдрома в Гонконге.J заразить. 2007;54(1):28–39. PubMed PMID: 16542729. Epub 15 марта 2006 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]67. Чен Р.-к., Тан Х.-п., Тан С.-ю., Лян Б.-л., Ван З.-ю., Фанг Дж.-к. Лечение тяжелого острого респираторного синдрома глюкостероидами: опыт Гуанчжоу. Грудь. 2006;129(6):1441–1452. 01.06.2006/ [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]68. Чжао Дж.-п., Ху Ю., Ду Р.-х., Чен З.-с., Цзинь Ю., Чжоу М. Консенсус экспертов по применению кортикостероидов у пациентов с пневмонией 2019-nCoV.Chin J Tuberc Respir Dis. 2020; (00) E007-E. чи. [Google Академия] 69. Zhou Y.-H., Qin Y.-Y., Lu Y.-Q., Sun F., Yang S., Harypursat V. Эффективность терапии глюкокортикоидами у пациентов с тяжелой новой коронавирусной пневмонией: протокол рандомизированного контролируемого исследования . Chin Med J. 2020; (00) E020-E. чи. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]70. Чен Н., Чжоу М., Донг С., Цюй Дж., Гонг Ф., Хан Ю. Эпидемиологические и клинические характеристики 99 случаев новой коронавирусной пневмонии 2019 г. в Ухане, Китай: описательное исследование.Ланцет. 2020;395(10223):507–513. 15.02.2020/ [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]71. Шакури Б., Карсилло Дж.А., Чатем В.В., Амдур Р.Л., Чжао Х., Динарелло К.А. Блокада рецепторов интерлейкина-1 связана со снижением смертности у пациентов с сепсисом с признаками синдрома активации макрофагов: повторный анализ предыдущего исследования фазы III. Критическая терапия Мед. 2016;44(2):275–281. PubMed PMID: 26584195. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]72. Биджоггеро М., Кротти К., Бекчолини А., Фавалли Э.Г. Тоцилизумаб в лечении ревматоидного артрита: доказательный обзор и отбор пациентов. Дизайн лекарств, терапия развития. 2018;13:57–70. PubMed PMID: 30587928. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]73. Танака Т., Нарадзаки М., Кисимото Т. Иммунотерапевтические последствия блокады ИЛ-6 при цитокиновом шторме. Иммунотерапия. 2016;8(8):959–970. PubMed PMID: 27381687. англ. [PubMed] [Google Scholar]74. Цю П. , Цуй С., Сунь Дж., Уэлш Дж., Натансон С., Эйхакер П.К. Терапия против фактора некроза опухоли связана с улучшением выживаемости в клинических исследованиях сепсиса: метаанализ.Критическая терапия Мед. 2013;41(10):2419–2429. PubMed PMID: 23887234. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]75. Удалова И., Монако К., Нанчахал Дж., Фельдманн М. Анти-ФНО-терапия. Микробиологический спектр. 2016;4(4) [PubMed] [Google Scholar]76. Макдермотт Дж. Э., Митчелл Х. Д., Гралински Л. Э., Эйсфельд А. Дж., Джоссет Л., Бэнкхед А. Влияние ингибирования передачи сигналов PP1 и TNFα на патогенез коронавируса SARS. BMC Сист Биол. 2016;10(1):93. -. PubMed PMID: 27663205. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]77.J G., Z T., X Y. Прорыв: хлорохина фосфат продемонстрировал очевидную эффективность при лечении пневмонии, связанной с COVID-19, в клинических исследованиях. Биологические тенденции. 2020;14(1):72–73. PubMed PMID: 32074550. [PubMed] [Google Scholar]78. многоцентровая совместная группа Департамента науки и технологий провинции Гуандун и Комиссии по здравоохранению провинции Гуандун по хлорохину для лечения новой коронавирусной пневмонии. Экспертный консенсус по хлорохинфосфату для лечения новой коронавирусной пневмонии.Китайский J Туберкулезные респираторные заболевания. 2020;43 E019-E. PubMed PMID: 32075365. [PubMed] [Google Scholar]79. H W., B L., Y T., PC C., L Y., B H. Улучшение прогноза сепсиса с помощью улинастатина: систематический обзор и метаанализ рандомизированных контролируемых исследований. Фронтирс Фармакол. 2019;10:1370. PubMed PMID: 31849646. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]80. M J., H H., S C., Y L., Y L., S P. Улинастатин облегчает вызванное ЛПС воспаление и повреждение легких путем блокирования сигнальных путей MAPK/NF-κB у крыс.Molecul Med Rep. 2019;20(4):3347–3354. PubMed PMID: 31432172. [PubMed] [Google Scholar]81. Имаи Ю., Куба К., Нили Г.Г., Ягубиан-Малхами Р., Перкманн Т., ван Лоо Г. Идентификация окислительного стресса и передачи сигналов Toll-подобного рецептора 4 как ключевого пути острого повреждения легких. Клетка. 2008;133(2):235–249. PubMed PMID: 18423196. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]82. Ширей К.А., Перкинс Д.Дж., Лай В., Чжан В., Фернандо Л.Р., Гусовский Ф. Грипп «тренирует» хозяина на повышенную восприимчивость к вторичной бактериальной инфекции.мБио. 2019;10(3):e00810–e00819. PubMed PMID: 31064834. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]83. Мацейка М., Харикумар К.Б., Милстиен С., Шпигель С. Передача сигналов сфингозин-1-фосфата и ее роль в заболевании. Тенденции клеточной биологии. 2012;22(1):50–60. PubMed PMID: 22001186. Epub 14.10.2011. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]84. Уолш К.Б., Тейджаро Дж.Р., Розен Х., Олдстоун М.Б.А. Подавление шторма: использование сигналов сфингозин-1-фосфатного рецептора для улучшения цитокинового шторма, вызванного вирусом гриппа.Иммунол Рез. 2011;51(1):15. 08.09.2011. [PubMed] [Google Scholar]85. Тейджаро Дж. Р., Уолш К. Б., Кахалан С., Фремген Д. М., Робертс Э., Скотт Ф. Эндотелиальные клетки являются центральными регуляторами амплификации цитокинов во время инфекции вируса гриппа. Клетка. 2011;146(6):980–991. PubMed PMID: 21925319. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]86. Уолш К.Б., Тейджаро Дж.Р., Уилкер П.Р., Яцек А., Фремген Д.М., Дас С.К. Подавление цитокинового шторма аналогом сфингозина обеспечивает защиту от патогенного вируса гриппа.Proc Natl Acad Sci USA. 2011;108(29):12018–12023. PubMed PMID: 21715659. Epub 29 июня 2011 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]87. Уччелли А., де Росбо Н.К. Иммуномодулирующая функция мезенхимальных стволовых клеток: механизм действия и пути. Энн NY Acad Sci. 2015;1351(1):114–126. [PubMed] [Google Scholar]88. Бен-Мордехай Т., Палевски Д., Глюксам-Гальной Ю., Элрон-Гросс И., Маргалит Р., Леор Дж. Ориентация на субпопуляции макрофагов для восстановления после инфаркта. J Сердечно-сосудистая фармакотерапия. 2014;20(1):36–51.01.01.2015. [PubMed] [Google Scholar]89. Lee J.W., Fang X., Krasnodembskaya A., Howard J.P., Matthay M.A. Краткий обзор: Мезенхимальные стволовые клетки при остром повреждении легких: роль паракринных растворимых факторов. СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ. 2011;29(6):913–919. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]90. K X., HC C., Y S., Q N., Y C., SH H. Лечение коронавирусной болезни-19 (COVID-19): опыт Чжэцзяна. Чжэцзян да сюэ сюэ бао Йи сюэ бан. 2020;49(1):0. PubMed PMID: 32096367. [PubMed] [Google Scholar]91. Зуккари С., Damiani E., Domizi R., Scorcella C., D’Arezzo M., Carsetti A. Изменения цитокинов, гемодинамики и микроциркуляции у пациентов с сепсисом/септическим шоком, подвергающихся постоянной заместительной почечной терапии и очистке крови с помощью CytoSorb. Очищение крови. 2020;49(1-2):107–113. [PubMed] [Google Scholar]92. Сюй З., Ши Л., Ван Ю., Чжан Дж., Хуан Л., Чжан С. Патологические признаки COVID-19, связанные с острым респираторным дистресс-синдромом. Ланцет Респират Мед. 2020 S2213-600(20)30076-Х. PubMed PMID: 32085846.англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]93. Лойшнер Ф., Куртис Г., Датта П., Мортенсен Л.Дж., Горбатов Р., Сена Б. Заглушение CCR2 при миокардите. Европейское сердце J. 2015; 36 (23): 1478–1488. PubMed PMID: 24950695. Epub 20 июня 2014 г. англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]94. Леушнер Ф., Датта П., Горбатов Р., Новобранцева Т.И., Донахью Дж.С., Куртис Г. Терапевтическое подавление миРНК в воспалительных моноцитах у мышей. Природные биотехнологии. 2011;29(11):1005–1010. PubMed PMID: 21983520.англ. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]95. Лондон Н.Р., Чжу В., Бозза Ф.А., Смит М.Ч.П., Грейф Д.М., Соренсен Л.К. Ориентация на Robo4-зависимую передачу сигналов Slit для выживания в условиях цитокинового шторма при сепсисе и гриппе. Sci Transl Med. 2010;2(23) 23ра19. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Системный IL-15, IFN-γ и сигнатура IP-10/CXCL10, связанная с эффективным иммунным ответом на SARS-CoV-2 у реципиентов мРНК-вакцины BNT162b2
https:// DOI.ORG/10.1016/J.CELREP.2021.109504GET Права и контент
Highlights
•
•
BNT162B2 MRNA Vaccine индуцирует подпись цитокина с участием IL-15, IFN-γ, и CXCL10
•
мРНК IFN-γ и IL-15, индуцированные вакциной, коррелируют со спайковым ответом антител
•
Сильная цитокиновая подпись при однократной вакцинации выздоравливающих лиц
•
Более сильная индукция цитокинов при бустерной вакцинации у лиц, ранее не подвергавшихся лечению.
Резюме
Ранний ответ на вакцинацию важен для формирования как гуморального, так и клеточного защитного иммунитета.Анализ врожденных сигнатур вакцины может предсказать иммуногенность, чтобы помочь оптимизировать эффективность мРНК и других стратегий вакцинации. Здесь мы характеризуем цитокиновый и хемокиновый ответы на дозу 1 ^st и 2 ^nd мРНК-вакцины BNT162b2 (Pfizer/BioNtech) у людей, ранее не инфицированных коронавирусной болезнью 2019 (COVID-19), и ранее инфицированных коронавирусом (COVID-19). NCT04743388). Временное повышение уровней интерлейкина-15 (IL-15) и гамма-интерферона (IFN-γ) вскоре после бустерной вакцинации коррелирует с уровнями спайк-антител, подтверждая их использование в качестве биомаркеров эффективного развития гуморального иммунитета в ответ на вакцинацию.Мы идентифицируем системные признаки, включая повышение уровня IL-15, IFN-γ и IP-10/CXCL10 после вакцинации 1 ^st, которые были обогащены фактором некроза опухоли альфа (TNF-α) и IL-6 после 2 вакцинации. ^и прививки. У лиц, ранее инфицированных COVID-19, однократная вакцинация приводит как к сильной индукции цитокинов, так и к титру антител, аналогичным тем, которые наблюдаются при ревакцинации у лиц, ранее не получавших антиген, что может иметь последствия для будущих рекомендаций общественного здравоохранения.
Ключевые слова
SARS-COV-2
SARS-COV-2
мРНК Vaccine
врожденный иммунитет
IL-15
IL-15
IFN-γ
Cytokines
IP10 / CXCL10
Spike Antibitody
Рекомендуемые изделия из Средства (0)
Доступность данных и кода
•
Данные и результаты анализа, полученные в ходе исследования, доступны по адресу https://github.com/NCI-VB/felber_covid_vaccine.
•
В этом документе не указан исходный код.
•
Любую дополнительную информацию, необходимую для повторного анализа данных, представленных в этом документе, можно получить по запросу у ведущего контактного лица.
© 2021 Автор(ы).
Рекомендуемые статьи
Ссылки на статьи
Потенциальная роль специфических ответов Mycobacterium tuberculosis на IL-2 и IFN-γ в различении латентной инфекции и активного заболевания после длительной стимуляции
Реферат
Анализы высвобождения гамма-интерферона (IGRA) могут точно диагностировать Mycobacterium tuberculosis ( M . туберкулёз ) инфекция. Однако эти анализы не делают различий между латентной туберкулезной инфекцией (ЛТБИ) и активным туберкулезным заболеванием (АТБ). В исследование было включено в общей сложности 177 человек, в том числе 65 пациентов с АТБ, 43 пациента с ЛТБИ и 69 неинфицированных туберкулезом контрольных пациентов (группа CON). Концентрацию IFN-γ, IP-10 и IL-2 определяли в мононуклеарных клетках периферической крови (МКПК) после кратковременной (24 ч) или длительной (72 ч) стимуляции туберкулёзными антигенами, включая ESAT-6/CFP- 10 (EC) и очищенное белковое производное (PPD).Стимулированное ЭК высвобождение IL-2 и гамма-интерферон-индуцируемого белка 10 (IP-10) (24 ч и 72 ч) показало хорошие диагностические характеристики при различении инфицированных и неинфицированных ТБ лиц, но не позволило отличить АТБ от ЛТБИ. После 72 ч инкубации высвобождение ИЛ-2 было выше у пациентов с ЛТИ после стимуляции ЭК и ППД. Соотношение IL-2/IFN-γ, стимулированное PPD, после 72-часовой инкубации обладало диагностическим потенциалом для различения ATB и LTBI с чувствительностью 90.8% и специфичность 97,7%. Кроме того, эти новые биомаркеры в сочетании с тестом T-SPOT в двухэтапной стратегии были подтверждены с высоким уровнем точности в проспективной клинической когорте. В совокупности соотношение IL-2/IFN-γ, стимулированное PPD, после длительной инкубации может быть альтернативным диагностическим биомаркером для различения пациентов с активным ТБ и субъектов с латентной инфекцией.
Образец цитирования: Sun Q, Wei W, Sha W (2016) Потенциальная роль Mycobacterium tuberculosis Специфические ответы IL-2 и IFN-γ в различении латентной инфекции и активного заболевания после длительной стимуляции.ПЛОС ОДИН 11(12): е0166501. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0166501
Редактор: Конг Цао, Университет Сучжоу, КИТАЙ
Получено: 12 октября 2016 г.; Принято: 28 октября 2016 г.; Опубликовано: 29 декабря 2016 г.
Авторское право: © 2016 Sun et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе.
Финансирование: Эта работа поддерживается Исследовательским фондом медицинского факультета Университета Тунцзи (11-046, To WS). Спонсор не участвовал в разработке дизайна исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.
1. Введение
Туберкулез (ТБ) остается серьезной глобальной проблемой здравоохранения с почти 10 миллионами новых случаев и 1.Ежегодно умирает 5 миллионов человек (доклад ВОЗ по туберкулезу, 2015 г.). В настоящее время ТБ наряду с ВИЧ занимает первое место среди причин смерти во всем мире. Кроме того, по оценкам, два миллиарда человек живут с латентным M . tuberculosis инфекция (LTBI), которая может представлять собой потенциальный источник активного туберкулеза в будущем[1,2]. Однако, несмотря на интенсивные исследования, быстрая и точная диагностика активного туберкулеза остается сложной задачей [3,4]. Поэтому срочно необходимы новые биомаркеры туберкулеза [3,4].
Анализ высвобождения гамма-интерферона (IGRA) широко используется и признан наиболее важным достижением в иммунодиагностике туберкулеза[5,6]. Он выявляет клеточно-опосредованный иммунный ответ путем измерения продукции in vitro IFN-γ в ответ на стимуляцию M . туберкулез -специфические антигены[5,6]. Существует два коммерчески доступных набора: QuantiFERON-TB Gold In-Tube Test (QFT) от Cellestis/Qiagen и тест T-SPOT.TB (T-SPOT) от Oxford Immunotec. М . tuberulosis -специфические антигены, используемые в IGRA, включают ранний секретируемый антиген-мишень-6 (ESAT-6), белок культурального фильтрата-10 (CFP-10) и антиген TB7.7 (Rv2654). IGRA систематически пересматривались и показали более высокую чувствительность и специфичность для M . туберкулез инфекция по сравнению с кожной туберкулиновой пробой (ТКП)[7,8]. Однако положительный результат IGRA не позволяет провести различие между активным ТБ и латентной инфекцией, что ограничивает его использование для рутинной диагностики активного ТБ в районах с высокой заболеваемостью ТБ[9].Таким образом, идентификация биомаркеров, которые могут быстро дифференцировать активную болезнь и латентную инфекцию, может стать крупным прорывом.
Помимо IFN-γ, другие цитокины, высвобождаемые M . tuberculosis -специфическая антигенная стимуляция исследовалась в качестве альтернативных или дополнительных биомаркеров M . туберкулез инфекция. Несколько исследований показали, что ответ IL-2 на M . tuberculosis -специфических антигенов значительно выше у больных активным туберкулезом, что позволяет предположить, что IL-2 может быть потенциальным биомаркером инфекции [10,11].Было показано, что гамма-интерферон-индуцируемый белок 10 (IP-10) является альтернативным диагностическим биомаркером для IFN-γ и вырабатывается в больших количествах [12]. Тем не менее, в нескольких исследованиях оценивали эффективность IL-2 и IP-10 у субъектов с латентной инфекцией или с высоким риском заражения туберкулезом, особенно в эндемичных по туберкулезу и вакцинированных БЦЖ районах. Кроме того, ретроспективное исследование Biselli et al показало, что высвобождение IL-2 в ответ на длительную инкубацию с M . tuberculosis -специфические антигены увеличивались только у субъектов с ЛТБИ.Это потенциально может исключить здоровых людей и провести различие между активным ТБ и ЛТБИ[13]. Поскольку длительная инкубация может обеспечить лучшую стимуляцию M . tuberculosis -специфические Т-клетки центральной памяти и в конечном итоге приводят к высвобождению различных цитокинов [4], диагностическая эффективность других биомаркеров-кандидатов, стимулированных в течение длительного времени инкубации, требует дальнейшего изучения.
Целью нашего исследования была разработка улучшенного иммунодиагностического анализа на основе Т-клеток с более высокой эффективностью в различении ATB от LTBI.Поэтому мы сначала провели поперечное исследование для изучения диагностической ценности IFN-γ, IP-10 и IL-2 в РВМС, стимулированных M . туберкулез -специфические антигены при выявлении больных на разных стадиях заболевания. Также исследовали диагностическую эффективность цитокинов после кратковременной (24 часа) или долговременной (72 часа) стимуляции. Выбранные биомаркеры были дополнительно проверены на их способность различать ATB и LTBI в клинической группе.
2.Методы
2.1. Учебные группы
пациента для нашего исследования были набраны в Шанхайской больнице легких в период с 2013 по 2015 год. Мы исследовали диагностическую эффективность цитокинов в двух исследовательских группах. Общая информация и клинические характеристики субъектов представлены в таблице 1. Группа I состояла из 177 человек, в том числе 65 больных активным туберкулезом (ATB), 43 пациента с латентной туберкулезной инфекцией (LTBI) и 69 неинфицированных больных туберкулезом (CON). . Диагноз больных АТБ устанавливался на основании клинических проявлений, лабораторного выделения в мазке кислотоустойчивых бактерий (КУБ), положительного посева М . туберкулез и классические радиологические изображения. Чтобы свести к минимуму влияние противотуберкулезного лечения на Т-клеточный ответ, все образцы были собраны до начала терапии. В исследование были включены только пациенты, получавшие стандартную противотуберкулезную терапию в течение <1 недели.
Субъекты с ЛТИ (группа ЛТБИ) были набраны из домохозяйств, контактировавших с больными АТБ. Тесты T-SPOT были проведены у всех субъектов, и ЛТИ определяли по положительному ответу на тест QuantiFERON-TB Gold In Tube без признаков активного заболевания.
69 неинфицированных ТБ контрольных пациентов (группа CON) были набраны из субъектов, прибывших для несвязанного медицинского обследования в больницу. Тесты T-SPOT также были проведены для всех субъектов, и были зачислены только те, у кого были отрицательные результаты T-SPOT, без клинических и рентгенологических признаков ATB и без известного истории воздействия ТБ.
Группа II состояла из 112 субъектов с подозрением на активный ТБ в проспективной когорте. Все субъекты были представлены с клиническими или рентгенологическими характеристиками, соответствующими активному туберкулезу.В конце концов у них был диагностирован активный туберкулез при положительном результате M . tuberculosis Получен посев и/или положительный мазок кислотных КУМ (группа АТБ). Те, кто не соответствовал критериям активного ТБ, были диагностированы как субъекты без активного заболевания ТБ (группа NTB).
Эксперименты и протоколы в этом исследовании были одобрены Советом по этике (ERB) Шанхайской легочной больницы и Медицинской школы Университета Тунцзи (Шанхай, Китай). От каждого включенного лица было получено информированное письменное согласие.Все исследования проводились в соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации, а также национальными/международными нормами.
2.2. Выделение РВМС и тест T-SPOT
Периферическую кровь (10 мл) брали из срединной локтевой вены локтевой ямки каждого участника и собирали в гепаринизированные вакутейнерные пробирки (Becton Dickinson, США). Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из гепаринизированной венозной крови центрифугированием Ficoll-Paque в течение 6 часов после сбора.Неокрашенные трипановым синим клетки подсчитывали с использованием автоматического счетчика клеток Countess (Invitrogen, США) и количество доводили до плотности 2,5×10 ⁶ клеток/мл. Набор T-SPOT.TB (Oxford Immunotec Ltd., Оксфорд, Великобритания) использовали для идентификации M . туберкулёз инфекция, в том числе латентная и активная M . tuberculosis инфекции и использовался в соответствии с инструкциями производителя. Результат анализа T-SPOT.TB считался положительным, если либо панель A (содержащая пептидные антигены, полученные из ESAT-6), либо панель B (содержащая пептидные антигены, полученные из CFP-10) имели шесть или более точек, чем отрицательный результат. контроля, и число было по крайней мере вдвое больше, чем в отрицательном контроле.Пятна считывали с помощью планшетного ридера ELISPOT (AID-Gmb-H, Германия).
2.3.
М . Туберкулез Анализ стимулированного высвобождения цитокинов, специфичный к антигену
РВМС культивировали при плотности 1,25х10 ⁶ клеток в 800 мкл среды AIM-V (Invitrogen Life Technologies, США) и инкубировали с ESAT-6 и CFP-10 (каждый в концентрации 10 мкг/мл; Sangon Biotech, Шанхай, Китай), очищенное белковое производное (PPD, 20 мкг/мл; RT50; Statens Serum Institute, Копенгаген, Дания) или без стимулятора (отрицательный контроль).После инкубации при 37°C в течение 24 часов (короткое время) и 72 часов (длительное время) супернатанты собирали и хранили при -80°C для периодического анализа.
2.4. Измерение IFN-γ, IP-10 и IL-2/анализ цитокинов
Концентрации цитокинов измеряли в супернатантах РВМС, стимулированных M . туберкулёз -специфические антигены. Набор Biolegend ELISA использовался для определения уровней IFN-γ, IP-10 и IL-2 в соответствии с инструкциями производителя. Образцы разводили 1:2 для IFN-γ и IL-2 и 1:10 для определения IP-10.Все образцы тестировали в двух повторностях, и результаты выражали в пг/мл.
2.5. Статистический анализ
М . tuberculosis -специфический антиген-стимулированный ответ цитокинов определяли как концентрацию цитокинов в супернатанте нестимулированных РВМС, вычтенную из концентрации цитокинов в супернатанте РВМС, стимулированных ESAT-6/CFP-10 или PPD, по данным ELISA. GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния) применяли для статистического анализа и графического отображения данных.Сравнение распределения биомаркеров между двумя группами проводили с использованием U-критерия Манна-Уитни. Различия между тремя группами сравнивались с использованием теста Крускала-Уоллиса, а затем пост-теста Данна для корректировки множественных сравнений. Значение P <0,05 считалось статистически значимым. Для оценки диагностической эффективности биомаркеров был проведен анализ кривой рабочих характеристик приемника (ROC). Пороговые значения оценивали при различной чувствительности и специфичности и определяли по максимальному индексу Юдена (YI), i . и . чувствительность + специфичность -1[14].
3. Результаты
3.1. Характеристики зарегистрированных лиц
В общей сложности 177 субъектов были набраны в группу исследования I для скрининга биомаркеров. Характеристики включенных в исследование субъектов были обобщены в Таблице 1. Между тремя группами не было существенных различий в отношении возраста или пола. Уровень вакцинации БЦЖ составил 64,6% в группе ATB, 72,1% в группе LTBI и 66,7% в контрольной («CON») группе. , без существенной разницы между ними.
65 больных активным туберкулезом включали 58 с легочным туберкулезом, 2 с туберкулезом позвоночника, 2 с туберкулезом лимфатических узлов и 3 с туберкулезным менингитом. У 25 пациентов с активным туберкулезом культура мокроты была положительной на M . туберкулез , у 7 пациентов был положительный мазок кислотоустойчивых бактерий (КУБ), у 28 пациентов были положительные результаты по обоим маркерам, а у 5 пациентов оба маркера были отрицательными, но у них был диагностирован ТБ на основании положительных результатов гистопатологического исследования, клинических проявлений и грудной клетки. рентгенография.Положительный показатель T-SPOT составил 90,8% (59/65) в группе ATB.
3.2.
М . туберкулез -специфические цитокиновые ответы IFN-γ, IP-10 и IL-2 после кратковременной стимуляции
Для оценки диагностического потенциала цитокинов РВМС из групп ATB, LTBI и CON сначала стимулировали EC или PPD в течение 24 часов. В исследовании анализировали как стимулированные антигеном, так и нестимулированные ответы цитокинов. Уровни IFN-γ и IL-2 были относительно низкими в нестимулированных образцах из всех трех групп, и существенных различий не наблюдалось (рис. 1А).Однако нестимулированное высвобождение IP-10 было значительно выше в группе ЛТБИ, чем в группах ATB и CON (p = 0,0013 и p = 0,0024 соответственно; рис. 1A). После стимуляции EC высвобождение IFN-γ, IP-10 и IL-2 был значительно выше в группах ATB и LTBI, чем в группе CON (рис. 1B). Стимулированные PPD ответы IFN-γ, IP-10 и IL-2 также были значительно выше в группе ATB и LTBI, чем в группе CON (рис. 1C). Однако в группе CON были относительно более высокие ответы на три цитокина после стимуляции PPD, чем после стимуляции EC, и все различия были значимыми (p<0,0.0001).
Рис. 1. Уровни IFN-γ, IP-10 и IL-2 у больных активным ТБ (ATB), у лиц с латентной ТБ инфекцией (LTBI) и у неинфицированных ТБ контрольных групп (CON) после кратковременного ( 24 ч) инкубация с нестимулированным контролем (А), ESAT-6/CFP-10 (Б) и PPD (В).
Каждая точка данных представляет собой концентрацию, наблюдаемую на нестимулированном уровне (A) или после стимуляции антигеном, за вычетом концентрации, наблюдаемой в нестимулированных контролях (B и C).
https://дои.org/10.1371/journal.pone.0166501.g001
Затем мы определили, экспрессировались ли какие-либо цитокины по-разному между группами ATB и LTBI. Как и ожидалось, высвобождение IFN-γ существенно не различалось между двумя группами, стимулированными EC или PPD. Для ответов IL-2 и IP-10 в краткосрочном анализе также не наблюдалось существенной разницы между ATB и LTBI после стимуляции EC или PPD.
3.3.
М . туберкулез специфические цитокиновые ответы IFN-γ, IP-10 и IL-2 после длительной стимуляции
Мы также проанализировали ответы цитокинов после стимуляции EC или PPD в течение более длительного времени инкубации (72 часа).Точно так же высвобождение IFN-γ, IP-10 и IL-2 было значительно выше в группах ATB и LTBI, чем в группе CON после стимуляции либо EC, либо PPD (рис. 2B и 2C). Затем мы проанализировали реакцию цитокинов между группами ATB и LTBI и определили, что субъекты с LTBI секретировали значительно более высокие уровни IL-2, чем субъекты в группе ATB со стимуляцией EC или PPD (p<0,0001). Напротив, ответ IFN-γ был значительно выше в группе ATB, стимулированной EC (p = 0.0,115) или ППД (р = 0,0098). Ответ IP-10 не показал существенной разницы между группами LTBI и ATB.
Рис. 2. Уровни IFN-γ, IP-10 и IL-2 у больных активным ТБ (ATB), у лиц с латентной ТБ инфекцией (LTBI) и у лиц, не инфицированных ТБ в контрольной группе (CON), после длительного (72 ч) ) инкубация с нестимулированным контролем (А), ESAT-6/CFP-10 (Б) и PPD (В).
Каждая точка данных представляет концентрацию, наблюдаемую при нестимулированном уровне (A) или после стимуляции антигеном, за вычетом концентрации, наблюдаемой в нестимулированных контролях (B и C).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0166501.g002
Нестимулированные PMBC от субъектов CON секретировали значительно меньше IFN-γ и IL-2, чем у субъектов с ATB и LTBI (рис. 2A). Интересно, что мы наблюдали, что нестимулированное высвобождение IP-10 было следующим, от высокого к низкому: LTBI, ATB и CON, и различия между каждыми двумя группами были значительными.
3.4. Диагностическая эффективность цитокинового ответа для различения больных ТБ и группы CON
Чтобы определить потенциальные диагностические биомаркеры, был проведен анализ ROC для оценки диагностической эффективности ответов цитокинов, которые, как было обнаружено в предыдущих анализах, обладали дискриминационной способностью.С этой целью мы сначала объединили данные, собранные у субъектов в группах ATB и LTBI, в одну группу, инфицированную ТБ (группу TBI), и сравнили их с данными группы CON. Результаты ROC-анализа между группами TBI и CON представлены в таблице 2. Как для краткосрочного, так и для долгосрочного анализа ответ IFN-γ, стимулированный EC, достиг наивысшей AUC 0,9752 и 0,9697 соответственно. Стимулированные ЭК IL-2 и IP-10 показали высокие значения AUC через 24 часа или 72 часа инкубации, которые были близки к таковым для IFN-γ, без существенной разницы в AUC между каждой парой (таблица 2).Результаты убедительно подтверждают диагностический потенциал IP-10 и IL-2 для различения людей, инфицированных туберкулезом, и лиц, не инфицированных туберкулезом. Примечательно, что после стимуляции PPD AUC всех трех цитокинов были значительно ниже, чем при стимуляции EC (p<0,0001).
3.5. Диагностическая эффективность цитокинового ответа для различения групп АТБ и ЛТБИ
Учитывая, что текущие анализы IGRAs хорошо работают при выявлении лиц, инфицированных ТБ (включая активный и латентный ТБ), мы затем исключили группу CON из рассмотрения и сосредоточились на выявлении биомаркеров, которые могли бы различать ATB и LTBI.Были отобраны цитокины, по-разному экспрессируемые в группах ATB и LTBI, и был проведен ROC-анализ для оценки их диагностического потенциала. Результаты представлены в таблице 3. После длительной инкубации IL-2, стимулированный PPD, достиг самой высокой AUC (0,8547; 95% ДИ: 0,7735–0,9159) и правильно классифицировал 63,1% и 97,7% участников в группах ATB и LTBI, соответственно. В образцах, стимулированных ЭК, ответ IL-2 также правильно классифицировал 70,8% и 76,7% участников соответственно.Стимулированный PPD ответ IFN-γ также достиг AUC 0,6455 (95% ДИ: 0,5419–0,7491) с чувствительностью 44,6% и специфичностью 79,1% (таблица 3).
Поскольку распределение стимулированного PPD IL-2 и ответа IFN-γ через 72 часа инкубации значительно отличалось между группами ATB и LTBI, но с противоположными тенденциями (ответ IL-2 был выше в группе LTBI, а ответ IFN-γ был выше в группе ATB) были рассчитаны отношения IL-2/IFN-γ в группах ATB и LTBI, чтобы увидеть, могут ли они улучшить диагностическую эффективность по сравнению с каждым из них по отдельности.Результаты показали, что соотношение IL-2/IFN-γ, стимулированное PPD, было значительно выше в группе с ЛТБИ, чем в группе ATB (рис. 3А). AUC составила 0,9504 (95% ДИ: 0,8979–1,003, p<0,0001) по ROC-анализу, а пороговое значение 1,14 дало чувствительность 90,8% и специфичность 97,7% для ATB. Соотношение ИЛ-2/ИФН-γ, стимулированное ЭК, также показало AUC 0,8916 (95% ДИ: 0,8231–0,9601, p<0,0001; рис. 3B) с чувствительностью 87,7 % и специфичностью 86,1 % (пороговое значение: 1.47). AUC отношения IL-2/IFN-γ, стимулированного ЭК, была значительно ниже, чем при стимуляции PPD (p<0,0.001), поэтому мы решили выбрать PPD-стимулированное отношение IL-2/IFN-γ в качестве биомаркера-кандидата для дальнейшей проверки.
Рис. 3. Соотношение ИЛ-2/ИФН-γ у лиц с активным ТБ (группа АТБ) и у лиц с латентной ТБ инфекцией (группа ЛТБИ) после длительной стимуляции PPD (A) и ESAT-6/CFP-10 (Б).
Горизонтальные линии показывают среднее соотношение ИЛ-2/ИФН-γ. В ROC-анализе субъекты с активным ТБ используются в качестве пациентов, а субъекты со латентным ТБ — в качестве контроля. Кривая ROC и AUC также показаны.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0166501.g003
3.6. Клиническая валидация биомаркеров в когорте лиц с подозрением на активный туберкулез
Чтобы подтвердить диагностическую эффективность стимулированного PPD соотношения IL-2/IFN-γ, мы набрали 112 пациентов с подозрением на туберкулезную инфекцию в клиническую исследовательскую группу (группа II). Была использована двухэтапная диагностическая стратегия: во-первых, тесты T-SPOT для обнаружения M . туберкулез инфекция были выполнены для всех предметов; Во-вторых, субъекты с положительным T-SPOT тестировались на стимулированное PPD соотношение IFN-γ/IL-2, чтобы дифференцировать ATB и LTBI.Диагностическая процедура и результаты показаны на рис. 4. Согласно окончательному диагнозу из 112 субъектов группы II, у 39 был диагностирован активный туберкулез (12 пациентов имели только положительный посев на M , туберкулез , только 6 пациентов). имели положительный мазок на КУМ, а у 21 пациента оба были положительными). Чувствительность и специфичность рассчитывали, когда пациенты с активным ТБ (группа ATB) были определены как пациенты, а субъекты без активного ТБ (группа NTB) были определены как контрольная группа.Только тест T-SPOT показал чувствительность 92,3% и специфичность 58,9%. В сочетании с соотношением IL-2/IFN-γ, стимулированным PPD, с использованием установленного ранее порогового значения достигается чувствительность 87,1% и специфичность 97,3%. Специфичность комбинированного теста была значительно выше, чем у T-SPOT. Только тест TB (p<0,0001).
Рис. 4. Результаты диагностики и стратегия выявления активного ТБ в контрольной группе.
Пациенты с подозрением на ТБ сначала были протестированы с помощью T-SPOT на этапе 1, затем субъекты с положительным результатом на T-SPOT были протестированы с помощью долгосрочных (72 часов) анализов IFN-γ/IL-2, стимулированных PPD, на этапе 2.Положительные результаты двухэтапного анализа определяли, когда оба теста были положительными, и отрицательные результаты, когда любой из них был отрицательным. Золотой стандарт для ATB был основан на положительном M . Культура туберкулеза и/или положительный мазок на кислотоустойчивые бактерии (группа ATB). Субъекты без активного туберкулеза были определены как группа NTB.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0166501.g004
4. Обсуждения
Антиген-специфические Т-клетки памяти можно разделить на эффекторные Т-клетки памяти (ТЕМ) и Т-клетки центральной памяти (ЦМ) [15].Клетки ТЕМ экспрессируют рецепторы, которые позволяют им мигрировать в воспаленные периферические ткани и дифференцироваться непосредственно в эффекторные клетки. Затем эти клетки могут быть обнаружены путем измерения высвобождения IFN-γ в краткосрочных инкубационных анализах с использованием цельной крови или PBMC, стимулированных M . туберкулёз антигены. Напротив, обычно считается, что клетки ТКМ являются долгоживущими и могут служить предшественниками эффекторных Т-клеток в ответах на отзыв, которые потребуют более длительных анализов стимуляции [4].Следовательно, различные периоды инкубации могут привести к исследованию различных Т-клеток памяти и профилей цитокинов. По сравнению с анализами кратковременной стимуляции, большее количество клеток ТКМ может быть активировано, если время инкубации будет увеличено. Эти два подмножества циркулирующих Т-клеток памяти могут участвовать в разных типах иммунных ответов и, следовательно, иметь разные эффекторные способности и продуцировать разные цитокиновые профили [15]. Было доказано, что при активации клетки ТКМ продуцируют только ИЛ-2, в то время как субпопуляции ТЕМ продуцируют высокие уровни IFN-γ, но умеренно сниженные уровни ИЛ-2 [15].Это может объяснить, почему в нашем исследовании картина цитокинового ответа IL-2 после 72-часовой стимуляции отличалась от таковой после 24-часовой стимуляции и показала потенциальную диагностическую ценность для различения ATB и LTBI.
Несколько исследований доказали, что IP-10
является альтернативным биомаркером инфекции ТБ, и тесты на основе IP-10, по-видимому, сравнимы с текущими IGRA[12]. Было показано, что у маленьких детей и ВИЧ-инфицированных пациентов с низким количеством CD4 IP-10 снижает частоту неопределенных результатов, учитывая его высокие уровни [16].Наши результаты согласовывались с этими исследованиями и показали, что IP-10, стимулированный ESAT-6/CFP-10, имел самую высокую AUC при обнаружении инфекции ТБ, но не смог отличить ATB от LTBI [11,17,18]. Однако, в отличие от IFN-γ и IL-2, исходный уровень IP-10 оказался значительно выше в группе ЛТБИ, чем в группах ATB и CON. Аналогичные тенденции наблюдались и в ряде других исследований [11,19,20]. Это может указывать на защитную роль IP-10 в продолжающемся контроле субклинической инфекции с помощью M . туберкулёз у больных ЛТБИ. В нашем исследовании базовый уровень IP-10 показал AUC 0,6837 (95% ДИ) при различении ATB и LTBI, который нельзя было использовать отдельно в качестве альтернативного маркера. Необходимы дальнейшие исследования по оценке диагностической эффективности IP-10 в сочетании с другими биомаркерами.
Мы показываем, что PPD-стимулированные IL-2 и IFN-γ имеют потенциальную ценность для различения ATB и LTBI. Однако ни один из двух цитокинов не может быть использован отдельно в качестве альтернативного диагностического маркера.Напротив, использование соотношений цитокинов имело более сильную дискриминационную силу при диагностике различных стадий туберкулезной инфекции. Соотношение IFN-γ/IL-2 в сыворотке показало потенциальную диагностическую ценность для выявления внелегочного туберкулеза [21]. Другое проспективное клиническое исследование также показало, что относительный сдвиг от IL-2 к продукции IFN-γ в Т-клетках был связан с активным туберкулезом [22]. Наши результаты также показали, что соотношение IL-2/IFN-γ, стимулированное PPD, после 72-часовой стимуляции было наиболее точным дискриминатором между ATB и LTBI среди всех биомаркеров.Различия в соотношении ИЛ-2/ИФН-γ, наблюдаемые в нашем исследовании, согласуются с предыдущими исследованиями, в которых указывалось, что частота ИЛ-2-секретирующих и ИЛ-2/ИФН-γ-двойных секретирующих CD ⁴⁺ центральная количество Т-клеток памяти увеличилось, а количество IFN-γ-секретирующих эффекторных Т-клеток памяти было снижено у неактивных больных ТБ по сравнению с пациентами с активными формами ТБ [23,24,25]. Эти изменения профилей цитокинов могут быть связаны с бактериальной нагрузкой, характерной для разных стадий инфекции. У неактивных или успешно леченных больных ТБ повышенный ответ ИЛ-2 может быть следствием размножения Т-клеток центральной памяти, вызванного снижением М . туберкулёз антигенные нагрузки[26].
В нашем исследовании разница в соотношении IL-2/IFN-γ между ATB и LTBI была более очевидной после 72-часовой стимуляции, чем через 24 часа, и достигала самой высокой AUC, чтобы отличить ATB от LTBI, на основе ROC-анализа. Эти результаты могут быть связаны с более адекватной стимуляцией ответов Т-клеток центральной памяти с использованием анализа долгосрочной стимуляции [15]. Еще одним интересным открытием было то, что соотношение IL-2/IFN-γ, индуцированное PPD, показало более высокую диагностическую ценность, чем соотношение, индуцированное ESAT-6/CFP-10.Будучи смешанным антигеном, PPD может вызывать более комплексные и разнообразные иммунные ответы, чем ESAT-6/CFP-10 [27]. Таким образом, анализы, стимулированные PPD, могут привести к более очевидной разнице и способствовать лучшему различению ATB и LTBI.
5. Выводы
В заключение, это исследование показывает, что стимулированное ЭК высвобождение IL-2 и IP-10 после краткосрочной и долгосрочной инкубации представляет собой хороший диагностический инструмент для различия между ТБ-инфицированными и ТБ-неинфицированными людьми. .Кроме того, стимулированное PPD отношение IL-2/IFN-γ после 72-часовой инкубации обладало диагностическим потенциалом для различения ATB и LTBI. Эти новые биомаркеры были проверены с высоким уровнем точности в проспективной клинической когорте. Мы предполагаем, что включение этих новых биомаркеров в иммунодиагностические анализы может помочь в диагностике ATB и LTBI в будущем.
Вклад авторов
Концептуализация: QS WW WS.
Контроль данных: QS WW WS.
Формальный анализ: QS WS.
Финансирование приобретения: WS.
Расследование: WS.
Методология: QS WW WS.
Администрация проекта: QS WS.
Ресурсы: QS WW WS.
Программное обеспечение: QS WW WS.
Надзор: WS.
Валидация: QS WS.
Визуализация: QS WW WS.
Письмо – первоначальный вариант: QS WW WS.
Написание – проверка и редактирование: WS.
Каталожные номера
1. Барри К.Э. 3-й, Бошофф Х.И., Дартуа В., Дик Т., Эрт С., Флинн Дж. и др. (2009) Спектр латентного туберкулеза: переосмысление биологии и стратегий вмешательства. Nat Rev Microbiol 7: 845–855. пмид:19855401
2. Corbett EL, Watt CJ, Walker N, Maher D, Williams BG, Raviglione MC, et al.(2003) Растущее бремя туберкулеза: глобальные тенденции и взаимодействие с эпидемией ВИЧ. Arch Intern Med 163: 1009–1021. пмид:12742798
3. Hur YG, Crampin AC, Chisambo C, Kanyika J, Houben R, Ndhlovu R, et al. (2014)Идентификация иммунологических биомаркеров, которые могут дифференцировать латентный туберкулез от воздействия нетуберкулезных микобактерий из окружающей среды у детей. Clin Vaccine Immunol 21: 133–142. пмид:24285818
4. Walzl G, Ronacher K, Hanekom W, Scriba TJ, Zumla A (2011)Иммунологические биомаркеры туберкулеза.Nat Rev Immunol 11: 343–354. пмид:21475309
5. Пай М., Денкингер С.М., Кик С.В., Рангака М.Х., Цверлинг А., Окслейд О. и др. (2014) Анализы высвобождения гамма-интерферона для обнаружения инфекции Mycobacterium tuberculosis. Clin Microbiol Rev 27: 3–20. пмид:24396134
6. Тиллай М., Поллок К., Парик М., Лалвани А. (2014) Анализы высвобождения гамма-интерферона при туберкулезе: текущие и будущие применения. Эксперт Respir Med 8: 67–78. пмид:24308653
7.Moran Mendoza O (2011) Анализы высвобождения гамма-интерферона для диагностики латентной инфекции Mycobacterium tuberculosis. Eur Respir J 38: 1237–1238; ответ автора 1238–1239. пмид:22045795
8. Рангака М.Х., Уилкинсон К.А., Глинн Дж.Р., Линг Д., Мензис Д., Мванса-Камбафвиле Дж. и др. (2012)Прогностическая ценность анализов высвобождения гамма-интерферона при заболевании активным туберкулезом: систематический обзор и метаанализ. Ланцет Infect Dis 12: 45–55. пмид:21846592
9.Metcalfe JZ, Everett CK, Steingart KR, Cattamanchi A, Huang L, Hopewell PC и другие. (2011) Анализы высвобождения гамма-интерферона для диагностики активного туберкулеза легких у взрослых в странах с низким и средним уровнем дохода: систематический обзор и метаанализ. J Infect Dis 204 Suppl 4: S1120–1129.
10. Мамиши С., Поуракбари Б., Теймури М., Руббо П.А., Туайон Э., Кешткар А.А. и соавт. (2014) Диагностическая точность ИЛ-2 для диагностики латентного туберкулеза: систематический обзор и метаанализ.Eur J Clin Microbiol Infect Dis 33: 2111–2119. пмид:24993150
11. Wang S, Diao N, Lu C, Wu J, Gao Y, Chen J и др. (2012)Оценка диагностического потенциала IP-10 и IL-2 в качестве биомаркеров для диагностики активного и латентного туберкулеза у населения, вакцинированного БЦЖ. PLoS One 7: e51338. пмид:23272100
12. Ruhwald M, Aabye MG, Ravn P (2012)Испытания высвобождения IP-10 в диагностике туберкулезной инфекции: текущее состояние и будущие направления.Эксперт Rev Mol Diagn 12: 175–187. пмид:22369377
13. Бизелли Р., Мариотти С., Сарджентини В., Саузулло И., Ластилла М., Менгони Ф. и другие. (2010)Обнаружение интерлейкина-2 в дополнение к гамма-интерферону позволяет различать больных активным туберкулезом, латентно инфицированных лиц и контрольную группу. Clin Microbiol Infect 16: 1282–1284. пмид:19886902
14. Youden WJ (1950) Указатель рейтинга диагностических тестов. Рак 3: 32–35. пмид:15405679
15. Саллусто Ф., Лениг Д., Форстер Р., Липп М., Ланзавеккья А. (1999) Два подмножества Т-лимфоцитов памяти с различными потенциалами самонаведения и эффекторными функциями.Природа 401: 708–712. пмид:10537110
16. Кабир Б.С., Раджа А., Раман Б., Тангарадж С., Лепортье М., Ипполито Г. и др. (2011) Реакция IP-10 на антигены RD1 может быть полезным биомаркером для мониторинга терапии туберкулеза. BMC Infect Dis 11: 135. pmid:21595874
17. Рувальд М., Домингес Дж., Латорре И., Лоси М., Ричелди Л., Пастиччи М.Б. и др. (2011)Многоцентровая оценка точности и эффективности IP-10 для диагностики инфекции, вызванной M.tuberculosis.Туберкулез (Эдинб) 91: 260–267.
18. Рувальд М., Бодмер Т., Майер С., Джепсен М., Хааланд М.Б., Ойген-Олсен Дж. и др. (2008) Оценка потенциала IP-10 и MCP-2 в качестве биомаркеров для диагностики туберкулеза. Евр Респир J 32: 1607–1615. пмид:18684849
19. Аззурри А., Соу О.Ю., Амедей А., Бах Б., Диалло С., Пери Г. и др. (2005)Уровни IFN-гамма-индуцируемого белка 10 и пентраксина 3 в плазме являются инструментами для мониторинга воспаления и активности заболевания при инфекции Mycobacterium tuberculosis.Микробы заражают 7: 1–8. пмид:15716076
20. Whittaker E, Gordon A, Kampmann B (2008) Является ли IP-10 лучшим биомаркером активного и латентного туберкулеза у детей, чем IFNgamma? PLoS One 3: e3901. пмид:167
21. Гоял Н., Кашьяп Б., Каур И. Р. (2016)Значение соотношения ИФН-/ИЛ-2 как циркулирующего диагностического биомаркера при внелегочном туберкулезе. Scand J Immunol 83: 338–344. пмид:26946082
22. Nemeth J, Winkler HM, Zwick RH, Muller C, Rumetshofer R, Boeck L, et al.(2012)Цитокиновые ответы периферических Т-клеток для диагностики активного туберкулеза. PLoS One 7: e35290. пмид:22523581
23. Сестер У., Фуссе М., Диркс Дж., Мак У., Прассе А., Сингх М. и др. (2011)Проточный цитометрический анализ цельной крови антиген-специфических профилей цитокинов CD4 T-клеток отличает активный туберкулез от неактивных состояний. PLoS One 6: e17813. пмид:21423578
24. Lanzavecchia A, Sallusto F (2000)Динамика ответов Т-лимфоцитов: промежуточные продукты, эффекторы и клетки памяти.Наука 290: 92–97. пмид:11021806
25. Caccamo N, Guggino G, Joosten SA, Gelsomino G, Di Carlo P, Titone L, et al. (2010) Многофункциональные CD4(+) Т-клетки коррелируют с активной инфекцией Mycobacterium tuberculosis. Eur J Immunol 40: 2211–2220. пмид:20540114
26. Миллингтон К.А., Иннес Дж.А., Хакфорт С., Хинкс Т.С., Дикс Дж.Дж., Досанж Д.П. и др. (2007)Динамическая взаимосвязь между профилями IFN-gamma и IL-2 Т-клеток, специфичных для Mycobacterium tuberculosis, и антигенной нагрузкой.Дж. Иммунол 178: 5217–5226. пмид:17404305
27. Sutherland JS, de Jong BC, Jeffries DJ, Adetifa IM, Ota MO (2010) Выработка TNF-альфа, IL-12(p40) и IL-17 может различать активную форму туберкулеза и латентную инфекцию в западноафриканской когорте. PLoS One 5: e12365. пмид: 20811496
Политика конфиденциальности — Z FINS

С помощью этой политики конфиденциальности мы предоставляем вам информацию о данных, которые собираются, хранятся и управляются на нашем веб-сайте
О НАС
Z РЕБРЫ / Z ФОЙЛЫ
Адрес нашего сайта: https://zfins.ЕС
С нашим сотрудником по вопросам конфиденциальности можно связаться по адресу: [email protected]
КАКУЮ ЛИЧНУЮ ИНФОРМАЦИЮ О СВОИХ КЛИЕНТАХ СОБИРАЕТ Z FINS?
Мы собираем очень мало информации о наших посетителях.
Вот типы информации, которую мы получаем от вас:
Информация, которую вы нам предоставляете: мы получаем и храним любую информацию, которую вы вводите на нашем веб-сайте или предоставляете нам любым другим способом. Мы используем предоставленную вами информацию для таких целей, как ответы на ваши запросы.Вы предоставляете такую информацию, когда размещаете заказы на нашем веб-сайте. Мы собираем такие данные, как ваше имя и адрес электронной почты, и информация будет храниться в виде электронной почты на нашем сервере.
КОНТАКТНЫЕ ФОРМЫ
При использовании контактных форм на этом веб-сайте ваше сообщение отправляется по электронной почте в наш офис, а информация, указанная в контактной форме, сохраняется на нашем почтовом сервере.
ПЕЧЕНЬЯ
В настоящее время мы не храним файлы cookie в вашем браузере.
ВСТРОЕННЫЙ КОНТЕНТ С ДРУГИХ ВЕБ-САЙТОВ
Статьи на этом сайте могут включать встроенный контент (например,г. видео, изображения, статьи и т. д.). Встроенный контент с других веб-сайтов ведет себя точно так же, как если бы посетитель посетил другой веб-сайт.
Эти веб-сайты могут собирать данные о вас, использовать файлы cookie, внедрять дополнительное стороннее отслеживание и отслеживать ваше взаимодействие с этим встроенным содержимым, включая отслеживание вашего взаимодействия со встроенным содержимым, если у вас есть учетная запись и вы вошли на этот веб-сайт.
АНАЛИТИКА
Мы используем Google Analytics для сбора информации о трафике на нашем веб-сайте.
Google Analytics используется с включенной анонимной информацией об IP-адресах. Это означает, что Google сократит IP-адреса пользователей в государствах-членах Европейского Союза или в других государствах-участниках Соглашения о Европейском экономическом пространстве. Только в исключительных случаях полный IP-адрес будет передаваться на сервер Google в США и там сокращаться.
IP-адрес, передаваемый браузером пользователя, не объединяется с другими данными Google. Пользователи могут запретить сохранение файлов cookie, соответствующим образом настроив программное обеспечение своего браузера; пользователи также могут запретить Google собирать данные, сгенерированные файлом cookie и связанные с использованием ими онлайн-предложения и обработкой этих данных Google, загрузив и установив подключаемый модуль браузера, доступный по следующей ссылке: http://tools .google.com/dlpage/gaoptout?hl=ru.
Дополнительную информацию об использовании данных Google, возможных настройках и возражениях можно найти в декларации о защите данных Google (https://policies.google.com/technologies/ads) и в настройках показа рекламы Google (https: //adssettings.google.com/authenticated).
КОМУ МЫ ДЕЛИМСЯ ВАШИМИ ДАННЫМИ
Ваши данные не передаются через наши сайты третьим лицам.
КАК ДОЛГО Z FINS ХРАНИТ ВАШИ ДАННЫЕ
Поскольку ваша информация хранится в виде электронных писем на нашем сервере, она хранится бессрочно.
КАКИЕ ПРАВА ВЫ ИМЕЕТЕ НА ВАШИ ДАННЫЕ
Если у вас есть учетная запись на этом сайте или вы оставили комментарии, вы можете запросить получение экспортированного файла ваших личных данных, которые мы храним, включая любые данные, которые вы нам предоставили. Вы также можете потребовать, чтобы мы удалили все ваши личные данные, которые мы храним. Сюда не входят какие-либо данные, которые мы обязаны хранить в административных, юридических целях или целях безопасности.
Если вы хотите получить файл с вашими данными или удалить ваши данные, свяжитесь с нашим сотрудником по вопросам конфиденциальности по адресу info@zfins.ЕС
КУДА МЫ ОТПРАВЛЯЕМ ВАШИ ДАННЫЕ
Комментарии посетителей могут быть проверены с помощью автоматизированной службы обнаружения спама.
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
КАК МЫ ЗАЩИЩАЕМ ВАШИ ДАННЫЕ
Наш веб-сайт хранится на общем сервере хостинг-провайдера и ежедневно резервируется.
КАКИЕ ПРОЦЕДУРЫ НАРУШЕНИЯ ДАННЫХ У НАС ЕСТЬ
В случае утечки данных все затронутые пользователи будут уведомлены в течение 72 часов с момента обнаружения утечки данных.